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目的:癫痫是一种常见的神经系统疾病,以大脑神经元过度地、反复地超同步化放电为特征,临床表现为反复发作性、短暂性、通常为刻板性的中枢神经系统功能失常。癫痫反复发作可导致脑部神经元损伤,甚至坏死丢失,还会导致胶质细胞增生、突触重构等脑结构和功能的可塑性变化,而这些可塑性变化反过来又会使癫痫反复发作。另外,反复癫痫发作的患者常伴有认知功能损伤而极大地影响癫痫患者的生活质量。癫痫的发病机制很复杂,氧化应激损伤、谷氨酸兴奋性毒性、钙超载等多种因素均参与癫痫的发生,其中氧化应激被认为是在癫痫发生和癫痫所致认知损伤中的一个重要环节。以往研究发现,癫痫动物模型和癫痫患者的脑内均存在着活跃的氧化应激反应。氧化应激在癫痫中的重要角色提示我们:抑制氧化应激可能成为预防和治疗癫痫的重要方法。依达拉奉,3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮,是一种新型自由基清除剂,可以通过提供电子直接清除自由基、抑制自由基的生成及细胞膜脂质过氧化连锁反应。由于依达拉奉为高脂溶性小分子物质,其血脑屏障穿透率可达60%左右,已经广泛用于急性脑卒中的治疗。本实验研究对象是戊四氮所致急性和慢性癫痫小鼠模型,无论是急性模型还是慢性模型均用低、中、高三个剂量组的依达拉奉对其进行干预。本实验观察戊四氮所致急性癫痫小鼠模型的癫痫发作等级、全身强直阵挛发作(generalized tonic-clonic seizure(GTCS))潜伏期、死亡率,以及戊四氮所致慢性癫痫小鼠模型每日发作等级、死亡率及点燃率;其次通过Morris水迷宫检测戊四氮所致急性和慢性癫痫小鼠模型的认知功能;在认知功能检测完毕后检测戊四氮所致急性和慢性癫痫小鼠模型海马的氧化应激参数:丙二醛(malondialdehyde(MDA))和谷胱甘肽(glutathione(GSH))。如此,可以观察到依达拉奉对于戊四氮所致急性和慢性癫痫小鼠模型行为、认知的影响,还将探究其中的作用机制,阐明依达拉奉是否能够减轻癫痫发作所致的氧化应激水平。这将为依达拉奉应用于癫痫治疗提供更多的理论依据。方法:选用成年健康ICR小鼠制备戊四氮所致急性癫痫小鼠模型(仅给予1次80mg/kg戊四氮)和戊四氮所致慢性癫痫小鼠(每天给予40mg/kg戊四氮,连续21天)。无论是前者还是后者,均按照随机对照分组原则,分为生理盐水组(CON组)、戊四氮组(PTZ组)、依达拉奉5mg/kg组(Ed5组)、依达拉奉10mg/kg组(Ed10组)、依达拉奉20mg/kg组(Ed20组)。戊四氮所致急性癫痫小鼠模型在给予单剂量的80mg/kg戊四氮之前,连续5天给予不同剂量的依达拉奉进行(Ed组)或相应剂量的生理盐水(CON组和PTZ组)干预;戊四氮所致慢性癫痫小鼠模型在每日给予40mg/kg之前30min均给予不同剂量的依达拉奉进行(Ed组)或相应剂量的生理盐水(CON组和PTZ组)进行干预。两种模型在给予戊四氮后观察30min,观察指标包括依据Racine分级来评价小鼠癫痫发作等级、死亡率等行为学指标。于最后一次药物注射结束24h后行Morris水迷宫评价学习记忆能力,以此评估小鼠认知受损情况。水迷宫完成后24h,对小鼠断头取脑分离海马组织,行氧化应激指标(分光光度法测丙二醛和谷胱甘肽)检测。结果:1戊四氮所致急性癫痫小鼠模型1.1行为学观察经过连续5天的预处理后,PTZ组和Ed组均接受了80mg/kg的戊四氮腹腔注射,绝大部分小鼠出现全身强直阵挛性发作(GTCS),仅有一只PTZ组小鼠发作级数仅达到4级。三个剂量组的依达拉奉对于急性癫痫发作级数无影响(P>0.05),但均延长了小鼠全身强直阵挛性发作的潜伏期(P<0.05)。另外,5mg/kg及20mg/kg的依达拉奉有能够增加死亡率的倾向(但无明显统计学差异,P>0.05),而10mg/kg的依达拉奉有能够降低死亡率的倾向(但无明显统计学差异,P>0.05)。尽管Ed各组与PTZ组的死亡率相比未见明显统计学差异,但是Ed10组与Ed20组的死亡率相比较具有统计学差异(P<0.05)。这说明,不同剂量的依达拉奉对于急性戊四氮癫痫模型死亡率的影响是不同的。1.2 Morris水迷宫测试结果无论是在定位航行实验还是空间探索实验中,5组小鼠之间无显著差异(P>0.05)。1.3氧化应激指标5组之间的丙二醛及谷胱甘肽均无显著差异(P>0.05)。2戊四氮所致慢性癫痫小鼠模型2.1行为学观察CON组小鼠行为正常,无癫痫发作。21天内,PTZ组平均发作级数随时间逐渐升高,在戊四氮腹腔注射后相继出现点头、洗脸、甩尾、一侧或双侧前肢阵挛,随后大部分小鼠发展成为全身强直阵挛发作伴站立、摔倒。Ed5、Ed10和Ed20组表现基本同PTZ组,每日发作平均级数并未减低(P>0.05)。5组小鼠之间的死亡率及点燃率均无显著差异(P>0.05)。2.2 Morris水迷宫测试结果无论是在定位航行实验还是空间探索实验中,5组小鼠之间无显著差异(P>0.05)。2.3氧化应激指标5组之间的丙二醛及谷胱甘肽均无显著差异(P>0.05)。结论:1依达拉奉无明显的抗癫痫发作的作用。2不同剂量的依达拉奉对于戊四氮所致急性癫痫模型死亡率可能有不同的影响,其应用于癫痫模型的安全性仍需大量实验进一步证实。3本实验中,戊四氮所致急性和慢性癫痫模型无明显的认知损伤,未发现依达拉奉具有改善戊四氮癫痫模型小鼠认知功能的潜力。4依达拉奉的预处理对于戊四氮所致急性和慢性癫痫模型远期的氧化应激参数无明显影响。