【摘 要】
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基质辅助激光解析离子化(MALDI)技术以其简单快速,高通量,高的质量测试范围及高灵敏度等特点被广泛的应用于蛋白质组学。为了解决在MALDI测试过程中低丰度蛋白,翻译后修饰的蛋白以
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基质辅助激光解析离子化(MALDI)技术以其简单快速,高通量,高的质量测试范围及高灵敏度等特点被广泛的应用于蛋白质组学。为了解决在MALDI测试过程中低丰度蛋白,翻译后修饰的蛋白以及基质所带来的干扰等问题,以及实现样品靶上原位的富集纯化以及随后的质谱测试,我们做了如下的创新性研究:(1).首次利用疏水-亲水-疏水的表面图案化技术实现蛋白及多肽的一步富集纯化和MALDI检测。在这种图案化的样品板上,多肽/蛋白和盐会选择性的同时富集在图案化样品板的不同区域,从而获得一个很好的富集和除盐的效果。该方法最大的特点是无需引入额外的水洗步骤进行除盐,避免了样品额外的损失以及污染物的引入,达到靶上的一步富集和除盐的目的。(2).首次将预先结构化的样品板技术与苯硼酸特异性识别糖基化多肽/蛋白技术相结合,成功实现了糖基化多肽/蛋白在线的选择性富集纯化和MALDI检测。该方法最大的特点是样品溶液会富集在一个小的区域,改善了基质与样品的分布,使其能形成比较均匀的共结晶,从而改善质谱检测的灵敏度及重现性,适合于高通量的糖蛋白质组学研究中的应用。(3).首次将疏水-亲水-疏水表面图案化技术与表面辅助激光解析/离子化(SALDI)技术相结合,成功的实现了小分子多肽靶上原位一步富集纯化和SALDI检测。该方法最大的特点是SALDI技术的引入使得样品在富集纯化的同时还无需引入基质进行质谱测试,消除了基质带来的干扰,使谱图得到简化,这为蛋白质组学中小分子多肽的测定以及代谢组学里小分子代谢产物的鉴定提供了有利的手段。
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