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本文主要从以下两个部分展开论述： 第一部分 KIR基因多态性与强直性脊柱炎的易感性研究 目的: 强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一种慢性炎症性的自身免疫性疾病，其发病机制目前尚不明确。除了HLA-B27之外，近几年发现杀伤细胞免疫球蛋白样受体（killer cell immunoglobulin-like receptor，KIR）基因与AS也存在一定的相关性。但研究结果存在一定的矛盾。因此，本研究对浙南地区AS患者和健康对照的KIR基因分布进行分析，探讨KIR基因在AS中的作用。 方法: 1.收集浙南地区无血缘关系的AS患者和健康对照的EDTA-K2抗凝的外周血标本，分别为99例和100例，提取脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)。 2.用序列特异性引物聚合酶链反应(Polymerase chain reaction withsequence-specific primers，PCR-SSP)的方法对16种KIR基因进行检测。 3.根据KIR所带基因种类和数目的不同，将KIR基因型分为抑制性基因型（AA型）和非抑制性基因型（AB型和BB型），并对KIR基因型进行编号。 4.计算KIR基因表型频率、基因频率及基因型频率，分析AS患者和健康对照的KIR基因分布情况。用x2检验或者Fisher确切概率法比较AS患者和健康对照各KIR基因频率和基因型频率是否存在差异。 5.计算KIR单体型频率，用x2检验或者Fisher确切概率法分析其在AS患者和健康对照组之间是否存在差异。 结果: 1.所有AS患者均存在2DL1、2DL3、2DL4、3DL2、3DL3基因及假基因2DP1和3DP1。共有28种基因型，其中AA1型比例最高(35.35％)，其次为BX2型(13.13％)。 2.AS患者活化性基因KIR2DS3的基因频率明显高于健康人群(39.39％ vs21％,x2=7.992,P＜0.01)。 3.AS患者抑制性基因型（AA型）频率明显低于健康人群(P＜0.05)，但两组之间单倍体型比例不存在明显差异(P=0.256)。 结论: 活化性基因KIR2DS3在AS患者中的表型频率明显高于健康对照组，且AS患者活化性和抑制性KIR基因比例失衡，出现免疫活化的倾向，可能与AS的发生有一定的关系。 第二部分 miR-146a、miR-499单核苷酸多态性与强直性脊柱炎的相关性研究 目的: miRNAs是一种能够在转录后水平调节多种靶基因表达的非编码小RNAs。在miRNA序列上的单核酸多态性(Single-nucleotide polymorphism，SNP)能够影响miRNA的表达。并且，有研究表明其与许多关节炎性疾病的致病作用有关，如类风湿关节炎和骨关节炎。miR-146a和miR-499 SNPs与AS的相关性研究目前尚未见报道，故本研究首次探讨它们之间的联系，从而为AS的发病机制提供理论依据。 方法: 1.收集102例AS患者（未用药物治疗）及105例健康对照EDTA-K2抗凝血标本，提取DNA。 2.用测序法直接检测miR-146a各SNPs(rs2910164，rs57095329、rs6864584、rs2431697、rs2277920)及miR-499 rs3746444。 3.用x2检验分析各SNPs基因型频率分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。AS患者和健康对照的基因型频率和等位基因频率比较采用x2检验或者Fisher确切概率法。采用PASS11.0计算检验效能。 4.我们采用Kruskal-Wallis H检验或者ANOVA检验对各SNP不同基因型之间的AS患者外周血中C反应蛋白(CRP)和血沉(ESR)水平进行比较，判断不同基因型之间这两个指标是否存在差异。 结果: 1.AS患者和健康对照各SNP基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡(P值均大于0.05). 2.我们发现miR-146ars2910164与AS存在相关性。AS组G等位基因频率(49.0％ vs.35.2％,P=0.005, Pc=0.01, OR=1.767,95％CI=I.191～2.621)和GG基因型频率(24.5％ vs.11.4％，P=0.014，Pc=0.042，OR=2.516，95％CI=1.187～5.336)明显高于健康对照组。 3.miR-146a rs57095329、rs6864584、rs2431697、rs2277920 SNPs各基因型频率和等位基因频率在AS患者和健康对照组间不存在显著性差异(P值均大于0.05)。 4.miR-499 rs3746444 T/C SNP等位基因频率（P=0.369，power=15％）和基因型频率(Pc＞0.05，power=37％)在AS患者和健康对照组之间也不存在显著性差异。 5.基因连锁分析发现miR-146a rs57095329和rs2277920存在较强的连锁关系(D=0.904，r2=0.708);miR-146a5种SNPs共构建了19种单体型，其中CATTT单体型(rs2910164/rs57095329/rs6864584/rs2431697/rs2277920)在AS患者中的频率明显低于健康对照组(39.9％ vs53.6％，x2=6.576，P=0.01，OR=0.574，95％CI=0.375～0.879);而GGTTC单体型(rs2910164/rs57095329/rs6864584/rs2431697/rs2277920)频率在AS组明显高于健康对照(27.7％ vs14.9％，x2=8.792，P=0.003，OR=2.192,95％CI=1.296～3.707)。 6.miR-146a SNPs各基因型的AS患者外周血中CRP和ESR水平不存在显著性差异。AS患者外周血中CRP和ESR水平在miR-499各基因型之间也不存在显著性差异。 结论: 我们首次证实了miR-146a G等位基因和GG基因型是AS的危险因素。该SNP可能可以作为AS鉴定的候选指标。miR-146a rs57095329、rs6864584、rs2431697、rs2277920和miR-499 rs3746444可能与AS不存在相关性，但还需要大样本实验进一步验证。GGTTC单体型可能是AS的危险因素，而CATTT单体型可能是一个保护性因素。另外，这两个miRNA SNPs与AS的炎症指标(CRP、ESR)无关。