番茄花药培养体系的优化

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以4个番茄F1杂交种(C1,C2,C8,C10)和1个番茄纯系(2052)为试验材料进行番茄花药培养,研究了花蕾外部形态与小孢子发育时期的相关性;对花药愈伤组织诱导的影响因素如花药长度、花药消毒方法、基因型、基本培养基、激素组合配比和预处理;花药愈伤增殖影响因素如基本培养基、激素组合配比、水解酪蛋白浓度(Casein Hydrolysate)、水解乳蛋白浓度(Lactoalbumin Hydrolysate)、硝酸银和活性炭浓度;花药愈伤分化影响因素如基因型和激素等进行了试验研究,以期建立并优化得到一个高效的番茄花药培养体系。全文试验结果如下:1.当番茄花蕾长度为7.3-10.2mm,花药长度为4.2-7.1mm时,花冠和花药呈绿色、黄绿色或淡黄色,多数小孢子处于单核中晚期时,为番茄花药培养的适宜时段。2.番茄花药消毒较适的消毒方法为70%酒精消毒30s或者紫外线照射花蕾表面30s后,再用15%NaClO并加入2滴吐温-20消毒l0min。3.参试5个基因型花药愈伤组织诱导率不同,其中C10的诱导率最高,为34.22%,与其他4个基因型存在极显著的差异;番茄花药愈伤组织诱导的较适宜两个激素组合是0.5mg.L-1IAA+1.0mg.L-16-BA(MS2)和0.5NAA mg.L-1 +1.0mg.L-16-BA(MS5);诱导培养基中附加蔗糖40g.L-1能显著的提高愈伤诱导率;低温预处理2d时,花药的诱导率为7.78%,是未经低温预处理的2倍左右,0.6 mol.L-1甘露醇预处理2d,花药愈伤诱导率为8.14%,是对照组的2倍。4.番茄花药愈伤增殖的最适培养基为1.0 mg.L-1IAA+1.0 mg.L-1 6-BA(M2)和0.5 mg.L-1NAA+ 0.5mg.L-1KT(M3),其中C8在M2增殖培养基中,愈伤增殖系数高达0.61;在M2和M3较适增殖培养基中添加5g.L-1CH或0.5g.L-1LH,愈伤增殖系数进一步增大,最大可达1.0;添加10μmol.L-1硝酸银或0.2-0.5 g.L-1的活性炭可以有效地减轻愈伤组织的褐化状况,增强愈伤的活力。5.番茄花药培养的较适分化培养基是MS培养基附加2mg.L-1ZT和0.2mg.L-1NAA(M7)或单独添加2mg.L-1ZT(M8);基因型也显著影响愈伤组织的分化,供试材料中只有C2的愈伤组织分化得到1个不定芽,C1的愈伤分化得到1个单叶,2052愈伤分化得到10个不定根。
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