参麻益智汤(SYT)改善小鼠学习记忆能力的作用及机制研究

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目的:观察参麻益智汤(Shenma Yizhi Tang,SYT)对正常、记忆障碍以及拟阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型三种不同类型小鼠学习记忆能力的影响,并对其相关机制进行初步研究。方法:(1)SYT对正常小鼠学习记忆能力的影响健康昆明种小鼠随机分为4组,即正常对照组和中药低、中、高3个剂量组。正常对照组灌服双蒸水,中药组小鼠灌服相应剂量SYT,连续灌胃40d。第36天灌胃后采用Morris水迷宫进行行为学测试,连续5d,随后采用比色法检测海马组织胆碱乙酰基转移酶(choline acetyl transferase, ChAT)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AchE)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)的活性和丙二醛(1nalondialdehyde, MDA)的含量。(2)SYT对东莨菪碱所致记忆障碍小鼠学习记忆的影响健康昆明种小鼠随机分为6组,即正常对照组、东莨菪碱组(即模型组)、中药组(分为低、中、高3个剂量)、石杉碱甲组(即阳性对照组)。正常对照组和模型组小鼠灌服双蒸水,中药组灌服相应剂量SYT,石杉碱甲组灌服石杉碱甲溶液(双蒸水配制),连续灌胃40d。从第36d起正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水,其余各组小鼠腹腔注射东莨菪碱建立记忆障碍模型。30mmin后进行Morris水迷宫测试,连续5d,随后采用比色法检测海马组织ChAT, AchE、SOD的活性和MDA的含量。(3)SYT对拟AD模型小鼠学习记忆能力的影响健康昆明种小鼠随机分为6组,即正常对照组、AD模型组、中药组(分为低、中、高3个剂量)、维生素E组(Vitamin E, VE,阳性对照组)。腹腔注射D-半乳糖(60 mg·kg-1,d-1,生理盐水配制)和灌胃三氯化铝(5 mg·kg-1·d-1,双蒸水配置)90d制备AD模型小鼠,正常对照组腹腔注射生理盐水和灌胃双蒸水。在造模的后40d,正常对照组和模型组小鼠灌服双蒸水,中药组灌服相应剂量SYT, VE组灌服维生素E液。从第86d起灌胃结束后进行Morris水迷宫测试,连续5d,随后采用比色法检测海马组织ChAT、AchE、SOD的活性和MDA的含量,并用荧光实时定量PCR观察小鼠海马Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的表达,用免疫组织化学的方法观察海马caspase-3蛋白的表达。结果:(1)中剂量SYT能够改善正常小鼠水迷宫的学习成绩(即逃避潜伏期,P<0.05),低、高剂量SYT效果不显著(P>0.05):SYT中剂量组小鼠海马组织ChAT活性升高显著(P<0.05),而SYT各剂量组对小鼠海马组织AchE、SOD的活性和MDA的含量无明显影响(P>0.05)。(2)与正常对照组相比,东莨菪碱组小鼠水迷宫的学习和记忆成绩均下降,海马组织ChAT活性降低,AchE活性升高,提示记忆障碍模型成功建立。SYT中剂量组和石杉碱甲组小鼠水迷宫的学习和记忆成绩(即穿越平台次数和目标象限停留时间)均优于模型组:SYT中剂量组和石杉碱甲组海马组织ChAT活性升高(P<0.05), AchE活性降低(P<0.01)。(3)与正常对照组相比,AD模型组小鼠水迷宫的学习和记忆成绩均下降,海马组织ChAT活性降低(P<0.05),AchE活性升高(P<0.05), MDA含量显著升高(P<0.01), Bax mRNA的表达显著升高(P(p<0.01), Bcl-2 mRNA的表达下降(P<0.01), caspase-3阳性细胞百分比升高(P<0.01),提示AD模型成功建立。中剂量SYT和VE能改善AD小鼠学习记忆;与模型组相比,SYT中剂量组小鼠海马组织AchE活性降低(P<0.05),中、高剂量组SOD活性增高,MDA含量降低(P<0.05),VE组SOD活性增高(P<0.01),MDA含量降低(p<0.05);与模型组相比,高剂量组Bax mRNA的表达下降(P<0.05),中剂量组和VE组下降更显著(P<0.01),高剂量组caspase-3阳性细胞百分比下降(p<0.05),中剂量组和VE组下降更显著(P<0.01)。结论:(1)中药SYT可以提高正常小鼠的学习记忆能力,其机制可能与提高小鼠海马组织ChAT活性,使脑内Ach含量增加有关。(2)中药SYT可以改善东莨菪碱所致记忆障碍小鼠的学习记忆能力,其机制可能与提高海马组织ChAT活性,降低AchE活性,从而使Ach合成增多,分解减少有关。(3)中药SYT可以改善拟AD模型小鼠学习记忆能力,其机制可能与SYT提高小鼠海马组织SOD活性,降低MDA含量、降低Bax mRNA的表达和caspase-3蛋白的表达,从而减少小鼠海马细胞的凋亡有关,同时也可能与AchE活性降低使Ach分解减少有关。
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