【摘 要】
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目的:研究孕激素对内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达及血管舒张功能的影响,并进一步在人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)探究相关的基因型机制。方法:在体内,孕激素受体拮抗剂RU486腹腔注射雌性及雄性SD大鼠,检测大鼠胸主动脉及肠系膜动脉eNOS蛋白、mRNA
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目的:研究孕激素对内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达及血管舒张功能的影响,并进一步在人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)探究相关的基因型机制。方法:在体内,孕激素受体拮抗剂RU486腹腔注射雌性及雄性SD大鼠,检测大鼠胸主动脉及肠系膜动脉eNOS蛋白、mRNA水平及血管舒张功能。在体外,使用孕激素处理人脐静脉内皮细胞,检测eNOS蛋白、mRNA水平及转录因子SP1(Specificity protein 1)、PR(Progesterone receptor)蛋白表达。CHIP、IP、荧光素酶报告基因试验进一步探究孕激素上调eNOS的转录机制。结果:RU486降低雌性大鼠胸主动脉及肠系膜动脉eNOS蛋白及mRNA水平,并使胸主动脉和肠系膜动脉的血管舒张功能受损。雄性大鼠中,RU486只降低了肠系膜动脉eNOS蛋白及mRNA表达并损伤其舒张功能,但对胸主动脉的eNOS表达及舒张功能无明显影响。在体外,孕激素呈浓度及时间依赖性增加了HUVECs中eNOS蛋白及mRNA表达。此外,免疫印迹表明孕激素增加HUVECs中转录因子SP1的表达,但不影响孕激素核受体(PR-A/B)的表达。免疫沉淀试验(IP)表明,孕激素增加了PR-A-SP1复合物的形成。染色质免疫沉淀试验(CHIP)证实了孕激素增加转录因子PR-A/B和SP1与eNOS启动子的结合。荧光素酶报告基因实验发现eNOS启动子上SP1或PR结合基序突变完全抑制了孕激素诱导eNOS启动子活性的增加。结论:孕激素通过增加PR-A-SP1复合物的形成,启动eNOS的转录,上调eNOS蛋白表达,从而改善血管内皮舒张功能。
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