背景Rh血型是一个较为复杂的人类红细胞血型系统,其临床重要性仅次于ABO血型系统。Rh血型系统包括55种抗原,其中D抗原的免疫原性最强。临床上Rh阴性个体若输注1个单位的RhD阳性红细胞,约27%～56%的个体可产生抗D抗体。RH基因位于人类染色体1p34.3-36.1,RHD基因的缺失、重组、突变等可导致D变异体的产生,因而准确鉴定血型,是临床避免严重溶血性输血反应、新生儿溶血病等不良后果的首要工作。但由于常规血清学方法的局限性,很难对D变异型的标本准确检测,因此我们拟施行Sanger测序法对新乡地区无偿献血者中D变异型个体进行基因型分析,以精准鉴定血型,为基因型匹配输血治疗奠定基础,保证血液输注的科学、高效。目的观察新乡地区Rh阴性无偿献血者的ABO和Rh表型分布情况,并对D变异型个体进行基因分型,以便了解Rh阴性献血者的遗传学特征及D变异体的多态性,构建本地区D变异型资料库,为临床制定个体化精准输血方案提供重要依据。方法1.血型血清学试验鉴定ABO和Rh血型:根据《全国临床检验操作规程》,所有无偿献血者均通过标准血型血清学方法进行ABO正反定型和RhD血型鉴定。初次筛选出RhD阴性标本269例,然后使用3个不同厂家的抗D试剂通过间接抗人球蛋白试验（IAT）进行RhD阴性确认,同时做自身对照排除自身抗体等干扰,最终检出D变异型标本13例,并对其进行Rh分型,确认C、c、E、e表型。2.D变异型标本进行基因分型:针对血清学检测疑似RhD变异型的个体,采集EDTA-K2抗凝全血2 ml,按照试剂操作说明书提取基因组DNA,对RHD基因外显子进行PCR扩增和Sanger基因测序,根据其单核苷酸多态性（SNPs）位点确定RhD变异型的种类。结果1.新乡地区Rh阴性无偿献血者ABO血型分布情况:在110667名无偿献血者中,初筛RhD阴性269例,在全部无偿献血者中占比为0.24%。进一步确认Rh阴性为256例（95.17%,256/269）。在256例Rh阴性个体中,ABO血型抗原的基因频率为r＞q＞p,表型特征为B＞A＞O＞AB,新乡地区RhD阴性无偿献血人群中ABO血型分布符合Hardy-Weinberg群体遗传规律。2.新乡地区Rh阴性无偿献血者的Rh表型分布情况:在确认的256例Rh阴性献血者中,Rh抗原表型以ccdee和Ccdee占比最多,分别为ccdee 155例（60.55%,155/256）、Ccdee 75例（29.30%,75/256）、ccd Ee 14例（5.47%,14/256）、CCdee 9例（3.51%,9/256）和ccd EE 3例（1.17%,3/256）。3.新乡地区D变异型个体的Rh抗原表型分布和基因型分析:经Rh阴性确认试验发现13例D变异型标本,其Rh CE表型分别为CCee（2/13）、Ccee（6/13）和cc Ee（5/13）。经Sanger基因测序分析,发现7例标本为弱D15型,其E6外显子发生845G＞A杂合突变;4例DEL型标本E9外显子发生1227G＞A杂合突变,其中1例同时合并第7内含子152位碱基存在C＞A突变;另外2例标本的E6～E9外显子被RHCE基因所取代,表现为RHD-CE（6-9）-RHD。结论1.新乡地区Rh阴性无偿献血者的ABO血型为B＞A＞O＞AB,Rh表型分布以ccdee和Ccdee居多,RhD变异型个体的Rh抗原以C、E阳性多见。2.新乡地区RhD变异体的等位基因类型以RHD*15、RHD*DEL1多见,另发现较少见的部分D类型RHD*DIV.3。