【摘 要】
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木拜糖酶是木聚糖过程中最关键的—个酶，水解木聚糖产生木低聚木糖和木糖。疏棉状嗜热丝孢茵DSM 5826产生的热稳定木聚糖酶A在较宽的pH范围内活性稳定，且降解产物基本均为低聚
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木拜糖酶是木聚糖过程中最关键的—个酶，水解木聚糖产生木低聚木糖和木糖。疏棉状嗜热丝孢茵DSM 5826产生的热稳定木聚糖酶A在较宽的pH范围内活性稳定，且降解产物基本均为低聚木糖，具有极大的工业化应用前景。
本文参照大肠杆菌密码子使用表，对GenBank中疏棉状嗜热丝孢菌DSM 5826木聚糖酶A的基因序列进行分析，找出非优势密码子，以引物拼接的方式，人工合成出采用优势密码子的基因xynA1。将其分别插入到pET-20b和热激质粒pHsh的多克隆位点，得到重组表达载体pET-20b-xynA、pSsh-xynA1。同时利用在线软件分析，优化pHsh-xynAl的mRNA二级结构，得到优化后的表达质粒pSsh-xynA2。将质粒pET-20b-xynA、pnsh-xynal、pHsh-xyna2分别转化大肠杆菌JMl09([)E3)、JMl09诱导表达。重组菌(pSsh-xynA2)6 h菌液最高酶活达到47.1 U/mL，木聚糖酶的表达量达到全细胞蛋白的13.O％，较优化前重组菌(pSsh-xynA1)的1．3％提高了10倍。重组菌(pET-20b-xynA)在37℃下 3 h菌液最高酶活达到4.1 U/mL，16℃下12 h菌液最高酶活达到50 U/mL。
对重组菌(pHsh-xyna2)产生的重组木聚糖酶进行纯化，经过热处理、DEAE-Sepharose FF离子交换层析、t-Butyl-HIC疏水层析三步共21.5倍的纯化最终得到电泳纯级的蛋白，并对纯酶的酶学性质进行了分析。纯酶的最适反应pH为6.0，最适反应温度为65℃，在pH5.0-8.0时温育30 min酶活力稳定。该酶的温度稳定性很好，在最适温度65℃下，酶的半衰期约为3 h。对该重组木聚糖酶降解木聚糖进行了研究，得出重组木聚糖酶主要降解木聚糖生成木二糖和木三糖，没有产生木糖。
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