人与金黄地鼠中胰腺癌与癌旁正常组织差异蛋白质组学研究

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目的:本课题通过差异蛋白质组学方法分别对人胰腺癌、金黄地鼠胰腺癌模型癌组织与正常组织差异表达蛋白进行分析,结果通过免疫组化染色进行进一步的验证,以探讨胰腺癌相关的生物标记物与部分阐明胰腺癌的发病机制。方法:金黄地鼠胰腺癌模型的建立;分别提取人与金黄地鼠胰腺癌组织和正常组织总蛋白,然后使用2-DE进行蛋白质分离并获得图像;采用PDQuest 7.1对2-DE胶上的蛋白点进行差异分析;切取差异表达蛋白点,然后采用MALDI-TOF-TOF-MS对差异蛋白点进行鉴定;免疫组化染色(SP法)对结果进行进一步验证。结果:(1)2-DE联合MALDI-TOF-MS技术在人、金黄地鼠胰腺癌组织中共分离鉴定了二十一个差异表达蛋白:尼克酰胺N-甲基转移酶(NNMT)、铁蛋白、谷胱甘肽S-转移酶、DNA拓扑异构酶、T细胞受体β-链、IKK抑制因子ε1、转胶蛋白、二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶1(DDAH1)、半乳糖激酶1、肌球蛋白;肌动蛋白、α-烯醇(化)酶、Annexin A4、角蛋白8、胸腺嘧啶核苷激酶、蛋白酶体α1亚单位、羧肽酶B1、核糖体蛋白P1、磷脂酶A2、联接蛋白3、脑磷酯结合蛋白。(2)其中:尼克酰胺N-甲基转移酶(NNMT)和铁蛋白2种蛋白在人胰腺癌组织中表达明显上调(>4倍),谷胱甘肽S-转移酶、DNA拓扑异构酶、T细胞受体β-链、IKK抑制因子ε1、转胶蛋白、二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶1(DDAH1)、半乳糖激酶1、肌球蛋白8种蛋白在人胰腺癌旁正常组织中表达明显上调(>4倍)。肌动蛋白、α-烯醇(化)酶、Annexin A4、角蛋白8、胸腺嘧啶核苷激酶5种蛋白在金黄地鼠胰腺癌组织中表达明显上调(>4倍),蛋白酶体α1亚单位、羧肽酶B1、核糖体蛋白P1、磷脂酶A2、铁蛋白、联接蛋白3、脑磷酯结合蛋白7种蛋白在金黄地鼠胰腺癌旁正常组织中表达明显上调(>4倍)。(3)免疫组化结果显示铁蛋白在人胰腺癌组织中表达上调,拓扑异构酶、谷胱甘肽-转移酶、肌球蛋白在正常组织中表达上调。结论:实验所得的差异蛋白尼克酰胺N-甲基转移酶、转胶蛋白、DNA拓扑异构酶、二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶1、铁蛋白、Annexin A4、联接蛋白3、α-烯醇(化)酶、羧肽酶B1、核糖体蛋白等可能与肿瘤细胞的浸润、转移、生长调节、缺氧耐受、及肿瘤组织血管形成有关;谷胱甘肽S-转移酶、肌球蛋白、核糖体蛋白P1、蛋白酶体α1亚单位与肿瘤细胞的蛋白质合成和降解有关;T细胞受体β-链、IKK抑制因子ε1与肿瘤细胞的信号转导有关;脑磷酯结合蛋白可能与肿瘤细胞膜的构建和重塑有关;这些蛋白质可能是胰腺癌早期诊断的生物学标记物和/或治疗靶标,其中Annexin A4与蛋白酶体α1亚单位等可能是胰腺癌诊断与治疗相关、新的生物学标记物。
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