论文部分内容阅读
叶黄素是一类天然存在的含氧类胡萝卜素,广泛存在于高等植物和藻类中,具有抗氧化、保护视力、抗肿瘤以及防止动脉粥样硬化等一系列显著的生理活性。天然存在的叶黄素由于本身的疏水性,可通过与脂蛋白的疏水域相互作用形成叶黄素蛋白复合体,以此维持自身稳定并发挥生理活性。在高等植物和藻类中,叶黄素与叶绿素等捕光色素与膜蛋白结合在一起,形成捕光色素蛋白复合体,定位于叶绿体类囊体膜上,在光合作用中发挥捕光及光能传递作用。小球藻中叶黄素含量可达0.2～0.8%(干重),利用小球藻生产叶黄素周期短、产量高、易于大规模培养。本研究旨在从小球藻中分离纯化出叶黄素蛋白复合体,并对其理化性质及生理活性进行表征。通过超声波破碎收集类囊体膜,利用CHAPS增溶色素蛋白,从小球藻中提取出色素蛋白初提液,通过DEAE阴离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱分离出叶黄素蛋白复合体LCLPC (Low-chlorophyll lutein-protein complexes) 和 HCLPC (High-chlorophyll lutein-protein complexes)。通过高效液相色谱法(HPLC)及分光光度法测得LCLPC中叶黄素：叶绿素：蛋白=9.72:0.35:100 (w/w/w), HCLPC中叶黄素：叶绿素：蛋白=11.39：6.96：100(w/w/w)。考察复合体ABTS自由基清除活力、DPPH自由基清除活力、脂质过氧化抑制活性、金属螯合力及还原力,结果表明,LCLPC和HCLPC具有体外抗氧化活性。利用CCl4构建小鼠化学性肝损伤模型,考察LCLPC、HCLPC体内抗氧化活性。结果表明,高剂量(100mg/mL BW)和低剂量(50mg/mL BW)的LCLPC和HCLPC均能降低CCl4诱导的肝损伤引起的血清ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)水平提高,降低肝脏指数和肝脏MDA(丙二醛)水平；同时还能提高肝脏中SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(过氧化氢酶)和GSH-PX (谷胱甘肽过氧化物酶)活力。试验结果说明叶黄素蛋白复合体LCLPC和HCLPC对CCl4诱导的小鼠肝损伤具有保护作用。利用Tween-20对色素蛋白进行增溶,通过硫酸铵分级沉降、DEAE阴离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱进行分离纯化,得到纯化的叶黄素蛋白复合体LPC(Lutein-protein complex),其多肽组分分子量为29.0kDa。通过HPLC对LPC中叶黄素进行定量,计算得叶黄素：蛋白=6.34：100(w/w),即一个蛋白分子结合3个叶黄素分子。利用ABTS自由基清除实验表征LPC体外抗氧化活性,结果表明,LPC具有较强的抗氧化活力,对ABTS自由基的半数清除浓度EC5o为77.7μg/mL。