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目的:腹主动脉瘤（Abdominal aortic aneurysm,AAA）因瘤体破裂死亡率较高。血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）衰老是导致腹主动脉瘤形成的主要原因。本研究旨在探讨miR-199a-5p/SIRT1信号通路在腹主动脉瘤VSMCs衰老中的调控作用,为AAA早期干预和治疗提供一定的理论依据。方法:选择AAA患者和器官捐献者的腹主动脉组织,进行原代血管平滑肌细胞培养、染色鉴定两组VSMCs。HE染色、衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色、免疫印迹检测p-p53、p21、SIRT1蛋白表达,比较两组VSMCs增殖及衰老情况的差异。累计群体倍增数（Cumulative population doubling）实验、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）检测、免疫荧光Ki67染色检测VSMCs的增值能力;γH2AX检测VSMCs损伤程度。酶联免疫吸附试验(（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测两组血清血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,AngⅡ）浓度。荧光染色检测活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平。通过AngⅡ建立VSMCs体外衰老模型,分为 Control、AngⅡ、N-乙酰基-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）组,观察三组ROS水平及衰老变化。将Control-VSMCs分为Control组、AngⅡ组、二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide,DMSO）组、白藜芦醇（Resveratrol）组,检测四组沉默信息调节因子1（Silent information regulator 1,SIRT1）蛋白、ROS水平及衰老变化。miRNA测序检测两组患者血清miRNA的差异。Q-PCR对血清、组织、VSMCs中的miR-199a-5p进行验证;采用双荧光素酶报告基因检测技术验证 miR-199a-5p 的靶基因。miR-199a-5p inhibitor 与 SIRT1-siRNA 共培养VSMCs,分别检测ROS水平、SA-β-gal染色阳性率、SIRT1、p-p53、p21蛋白表达以及对衰老的影响。结果:AAA患者腹主动脉中膜发生囊性变,伴炎性细胞浸润,符合AAA的病理特点。与对照组相比,AAA患者腹主动脉组织中p-p53和p21的表达增加、SA-β-gal染色阳性率增高,α-SMA/p-p53双阳性细胞的比例增加约5倍。与Control-VSMCs相比,AAA-VSMCs的累计群体倍增数、BrdU吸光度、Ki67表达下降,提示AAA-VSMCs增殖能力下降,而γH2AX表达升高,提示AAA-VSMCs损伤程度加重。AAA患者血清AngⅡ水平高于对照组。AAA组织及AAA-VSMCs中的ROS 水平均高于对照组。AngⅡ模型组ROS水平、SA-β-gal染色阳性细胞率及p-p53、p21蛋白表达均高于对照组;NAC处理后上述指标不同程度出现下降。AAA组组织及AAA-VSMCs中SIRT1蛋白表达均低于对照组。AngⅡ模型组SIRT1蛋白水平较对照组下降;给予Resveratrol处理后SIRT1蛋白表达量较AngⅡ组有升高,同时ROS水平、SA-β-gal染色阳性细胞率及p-p53、p21蛋白表达均低于AngⅡ组。miRNA测序检测发现AAA组血清中miR-199a-5p表达量显著高于对照组。通过Q-PCR进行血清、组织、AAA-VSMCs中验证了同样的变化。miR-199a-5p激动剂显著下调了 VSMCs中SIRT1的表达,而其抑制剂显著上调了 SIRT1的表达。双荧光素酶报告基因检测显示miR-199a-5p mimic显著降低了 SIRT1野生型报告基因的荧光素酶活性,而对SIRT1突变型报告基因的荧光素酶活性没有影响。MiR-199a-5p抑制剂可抑制ROS生成和VSMCs的衰老,上调SIRT1的表达,下调p-p53和p21的表达;miR-199a-5p抑制剂和SIRT1-siRNA共转染Control-VSMCs后显示:SIRT1-siRNA部分消除了 miR-199a-5p抑制剂对ROS生成、VSMCs衰老、SIRT1和p-p53/p21表达的影响。结论:本研究表明miR-199a-5p可通过下调SIRT1表达,促进ROS生成,介导p53/p21上调表达,诱导VSMCs的衰老。抑制miR-199a-5p活性能上调SIRT1表达,抑制ROS生成;下调p-p53和p21的表达,延缓衰老;而SIRT1-siRNA与miR-199a-5p抑制剂共培养VSMCs后能不同程度下调SIRT1表达,促进ROS生成;同时部分上调p-p53和p21的表达,部分抵消miR-199a-5p抑制剂延缓衰老的作用。MiR-199a-5p/SIRT1信号通路介导了 VSMCs的衰老。