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间隙连接细胞间通讯（gap junctional intercellular communication，GJIC）是细胞通讯的的重要内容，通过细胞间离子和分子的共享传递生长抑制/增殖信息，发挥细胞繁殖增生和转化控制的重要调节作用。GJIC功能下调（downregulation）可引起细胞持续性增殖和转化，而改善GJIC功能可以对细胞的增殖和转化产生明显的抑制效应。 GJIC的结构单位由连接子（connexon）组成，其功能蛋白成份是连接蛋白（connexin，Cx）。视其功能在细胞膜上定位呈点状分布（punctate distribution）和/或呈斑片状、聚集分布（plaques），对GJIC功能有重要调节作用。而且有越来越多的证据证明，间隙连接蛋白Cx基因本身是肿瘤抑制基因的一大家簇。所以Cx蛋白的表达（数量）及其在细胞膜上的定位，同样与细胞增殖及细胞转化直接相关。有报道，动物和人肺组织表达Cx43，不（或低）表达Cx26或Cx32等。目前认为，Cx43是正常人肺细胞（上皮和间质细胞）间隙连接通道的主要成份。 理论上，GJIC功能的抑制，可以发生在细胞粘连的缺失或细胞突变、以及Cx基因mRNA转录下调、Cx基因mRNA翻译过程或翻译后修饰异常。具体地说，肺细胞GJIC功能下调，可以在功能蛋白—Cx43基因mRNA转录、Cx43蛋白细胞膜上定位和组构、Cx43蛋白表达和磷酸化（NP、P1、P2、P3）水平上进行调控。 二氧化硅吸入导致矽肺的发生、发展，实质就是SiO2作用于肺组织，引发肺间质成纤维细胞的持续性增殖和胶原大量合成。但其生化和细胞学机制尚未明确。近年来的研究热点是肺泡炎细胞群（巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞）产生的细胞因子与成纤维细胞的相互关系。目前认为，SiO2刺激肺泡巨噬细胞（AMs）产生的细胞因子等各l 种活性物质，如 PDGF，IGFI和 FGF是肺纤维化发生的直接因素。D 但有关这方面报道结论不尽相同，主要是各细胞因于在纤维化发生的－具体效应份量，及其错综复杂的关系，目前尚难以搞清；细胞因子对D 成纤维细胞胶原合成和增殖作用机理也是不清楚的。I 本学位论文拟在上述研究和推论的基础上，研究肺成纤维细胞和l 肺泡上皮细胞 GJIC功能下调与矽肺纤维化发生的关系，及其下调机］制，包括CX43蛋白的定位的三维重建、CX43蛋白表达和CX43蛋白D 磷酸化状态，来探索矽肺纤维化及矽肺相关肺癌发生的机理。D 第一部分：二氧化晌蹦纤维化发生的体外研究细胞学模型建立D 不同剂量的a。刺激大鼠旧D拍泡巨噬细胞NMS)及佛波酯】（PMA）诱导分化 THP＊（具有肺巨噬细胞特性的人血单核细胞株）l 细胞培养上清液，分别作用于中国仓鼠肺成纤维细胞KHL)和貂肺上l 皮细胞(CCL64X 采用四哇盐(MTT广色法测定其增殖效应。其中IPMA－primed THP－1细胞为 AMs平行对照（paralleled control），以l 提高实验的重复性。结果显示，在 0，50，100，200，500 pglml SIO。l 浓度范围，5％SIOZ刺激 AMs和 10％SIOZ刺激的 PMAprimedITHP1细胞上清液分别作用于CHL和CCL64细胞，均可引起细胞l 增殖，从 200 pglml开始有显著意义，并存在剂量－效应关系。10％ SIO。刺激AMS的上清液作用CHL和CCL64细胞，则抑制细胞的 l 增殖。可以认为，5％SIOZ刺激的 AMs上清液和 10％PMA中rimed THP1细胞上清液作用于CHL和CCL书4，建立的体外细胞模型在 矽肺纤维化发生和矽肺相关肺癌的研究中有应用前景。D 核仁组成区相关的嗜银蛋白（aFgyroPhilic nuclear oFganlzer regions，Ag－NOR）是具有调节细胞 rDNA转录功能的一组酸性非 组蛋白，可以作为 rDNA转录活性标志，目前己广泛应用于研究细 l 胞生长活性，是反映细胞增殖的良好指标。即Ag－NOR数目与细胞 的增生活跃程度有关，其含量越高，表明细胞增殖越快。AgNOR 颗粒呈两种形态，一种呈团块状，即主核仁中的Ag－NOR颗粒(以 均数mAg－NOR表示，反映细胞倍体＼另一种为散在于细胞核内的 较小的银染颗粒，即卫星Ag利OR(以分散度dAg利OR表示，反 映细胞增殖人 SjOZ刺激的PMA个rimed THP＊细胞上清液对CHL 细胞AgNOR形态特征计数：油镜下，可见opglml剂量组以主核仁 中的 AgNOR颗粒为主，卫星核仁中 Ag－NOR颗粒较少。随着 SIOZ 31l 剂量浓度的增加，mAg－NOR和dAg－NOR逐渐增多，呈?