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研竞背景 哮喘（Asthma）是由多种细胞参与的气道慢性炎症性疾病，并伴有粘液高分泌、气道高反应性和可逆性气流受限。其中嗜酸性粒细胞（Eos）在哮喘的发病中起了重要作用。哮喘发病机理复杂。越来越多研究表明Th2细胞在哮喘的发生发展中起了重要作用。它们通过释放Th2型细胞因子如IL-4、IL-5等触发炎性反应，导致Eos在气道募集并活化。而Thi细胞则具有与Th2细胞相反的作用，他们通过释放Th1型细胞因子如IFN-Y、IL-12等拮抗Th2型细胞因子的功能而抑制哮喘反应。目前普遍认为哮喘患者存在Th：占优势的Thl／Th：失平衡。如何通过调节Thl／Thb型细胞之间的平衡已成为哮喘免疫治疗的一个热点。减毒活菌卡介苗（BCG）广泛用于预防结核病。但随着对BCG作用机制研究的深入，现认为BCG是一个很强的Thl型细胞诱导剂。所以对BCG是否可抑制Th：型细胞因子占优势的哮喘引起人们的兴趣。已有研究表明哮喘动物给予BCG可降低肺泡灌洗液（BALF）中Eos数，增加BALF及外周血中IFS-Y与IL-12水平，降低IL-4、IL-5水平，并可降低气道反应性，支持BCG对哮喘的保护作用。但关于BCG对外周血及骨髓中Bos影响及气道粘液分泌影响的研究很少，也未见有从细胞水平研究Thl／Th型细胞平衡变化的报道。研究目的在已建立的小鼠哮喘模型的基础上，观察BCG对哮喘小鼠气道炎症、外周血及骨髓中Eos水平及对气道粘液分泌的影响。并采用三色流式细胞分析法从细胞水平探讨BCG对哮喘小鼠外周血中Thd／Th2平衡的影响。 浙江大学硕士研究生学位论文 研究方法进择C57Bbo ＄性小鼠，年龄6W周，体重18－22克。以卵白蛋白（OVA）作为 抗原进行致敏和激发建立小鼠哮喘模型。先确定BCO抑制BAL中Eos的合适剂量（分 BCOI炉Cn乃、loCFUS、ldCFUS、ldCFUS四组）和给药时间（分第一次抗原说发前 4周、第一次抗原激发前2周两组），再以该剂量和给药时间对哮喘小鼠予以BCO干预， 对照组予等量注射用水。在最后一次抗原檄发后48小时分别测定BALF、外周血及骨瞩中 炎性细胞反应，组织病理观察肺组织炎症及气道粘液分泌情况，并采用三色光流式细胞分 析法测定外周血中TIlTh细胞比。 研究结果 ！．BCG于预后BALF中细胞总数及分类计数的变化：先确定BCG抑制BALF中Eos的合 适剂量和给药时间（BCOIoCFU，于第一次抗原激发前2周给药），以该剂量和给药时 间对哮喘小鼠进行干预。在OVA致敏激发组，无论细胞总数和分类计数均较生理盐水 （NS）阴性对照组明显槽高…刃．of)。BCG干预后，BALF中EoS较OVA致敏激发组 明显下降（p＜0．of），抑制率达 85％。同时淋巴细胞增加，与 OVA致敏激发组相比有统 计学差异（p＜0．05）。其它包括细胞总数、巨噬细胞及中性粒细胞与OVA致敏澈发组相 比均有所降低，但无统计学差异（p＞0．05）。 2 BCG干预后外周血中白细胞总数及Eos的变化：OVA致敏激发组与NS阴性对照组相比， 白细胞总数无明显差别，但EoS明显增加（r刀．of）。BCG干预后白细胞总数无明显变化 （po．05），但EoS明显下降O＜0．of)，抑制约70％。 3．BCG干预后骨髓中有核细胞总数及Eos的变化刃VA致敏激发组与NS阴性对照组相比， 细胞总数无明显差别，但EoS明显增加（r刃．of）。BCG干预组与OVA致敏澈发组相比， 细胞总数无明显差别，但EoS明显下降，抑制约50％。 4．BCG干预后哮喘小鼠外周血中仇 平衡的变化：可见在阴性对照组中，CD3＋T细胞， 包括CDSW细胞（即CD4＋T细胞，h细胞）和CDS＋T细胞（TC细胞）中表达IFN－ Y的细胞群均比表达 Ii4的细胞群高，即 h；＞】内，Tcl＞TcZ。而在 OVA致敏澈发组， CD 3＋T细胞中表达1卜4的细胞群与表达匝l个可的细胞群之比较阴性对照组明显增加， 2 析江大学硕土研究生学位论文 尤其在h细胞中Thwh；比值明显槽高。Ilo；干预后，To细胞与h细胞中表达IL－－4的 细胞群与表达 IINL可的细胞群之比较 OVA致敏澈发组降低，即 f，Tf Tcl比值均 下降。 5．BCG于预后哮喘小鼠肺组织学变化：NS阴性对照组小鼠气道及血管周围无EoS浸润， PAS染色未见气道上皮细胞粘液分泌。而OVA致敏檄发组小鼠气道及血管周围均可见大 量炎性细胞和Eos浸润，并波及到肺实质。PAS染色可见气道上皮杯状细胞增生肥大， 并有大量粘液分泌。BCG干预后，气道及血管周围仍可见较多炎性细胞，但主要为巨噬 细胞与淋巴细胞，EoS较OVA致敏激发组明显减少。PAS染色仍可见气道上皮细胞内粘 液分泌。 结 论 l．BCG可明显抑制哮喘小鼠BALF中E