猪链球菌2型斑马鱼模型的应用和剑尾鱼MHC-DXB基因Exon2片段的原核表达

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选用1005尾AB系斑马鱼(Danio rerio)以检测猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)不同分离株的致病力。检测对象为8株基因型均为mrp+ef+、对猪有致病力的SS2菌株。结果斑马鱼接种细菌12h后呈败血症病变,96h内的半数致死量(LD50)在6.92×103至5.01×104cfu之间。上述斑马鱼均可从体内重新分离到接种菌。同时检测一株基因型为mrp-ef-、对猪无致病力的SS2菌株,斑马鱼接种后96h内不表现任何病变,亦不出现死亡,对斑马鱼的LD50>106 cfu。SS2有毒力株和无毒力株对斑马鱼的LD50差异极显著。 以斑马鱼评价SS2分离株的主动免疫及被动免疫效果。AB系斑马鱼50尾/组,27℃恒温饲养。以灭活江苏分离株HA9801、灭活四川分离株ZY05719、溶菌酶释放蛋白(MRP)重组蛋白、pET空载体融合蛋白、猪抗HA9801高免血清、猪阴性血清及生理盐水腹腔注射各1组斑马鱼。14d后进行二免。29d后以50LD50剂量,腹腔内接种HA9801。另取灭活HA9801、灭活ZY05719同法免疫斑马鱼各1组,接种50LD50剂量ZY05719。接种后均观察7d,计算每组相对保护率(RSP)。结果对照组全数死亡,接种HA9801后注射HA9801全菌苗、ZY05719全菌苗、MRP重组蛋白、猪高免血清、猪阴性血清组的RSP(%)分别为78、72、61、72、8;接种ZY05719后,HA9801全菌苗、ZY05719全菌苗免疫组的RSP均为86%。显示两种全菌灭活苗对HA9801、ZY05719的攻击均有较好的保护效果,MRP重组蛋白及SS2高免血清对斑马鱼有一定保护作用。斑马鱼可用于SS2疫苗的筛选和抗SS2血清效价的检测。斑马鱼适宜作为研究猪链球菌2型菌株感染的动物模型。 为研究鱼类主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子功能,本研究亚克隆了剑尾鱼RR-B品系MHC-DXB基因的exon2基因,构建了重组质粒pET-exon2,进行了原核可溶性表达,利用抗His尾的多抗进行免疫印迹,鉴定表达产物为目的重组蛋白。
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