论文部分内容阅读
目的树突状细胞(dendritic cell, DC)是迄今为止所知道的抗原递呈功能最强的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell, APC),也是唯一可以激活初始免疫反应的APC,在对肿瘤产生主动免疫上起着重要的作用。树突状细胞瘤苗的制备与应用成为了肿瘤免疫治疗的研究热点。本实验研究辐射凋亡肿瘤细胞诱导的DC疫苗的制备及对C57BL/6小鼠负载膀胱肿瘤的免疫学效应。方法采用辐射法获取MB49细胞抗原并用其致敏骨髓来源的DC来制备DC疫苗。DC采用骨髓分离法从C57BL/6小鼠骨髓中分离细胞,接种于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中,加入重组鼠粒巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组鼠白细胞介素4(rmIL-4),体外诱导培养为未成熟DC,于第6天分别加入经辐射获取的凋亡的MB49小鼠膀胱癌细胞,刺激使其成熟,制备膀胱肿瘤疫苗。观察其形态同时流式细胞仪检测各组成熟DC表面分子CD80、CD86的表达情况。用MB49小鼠膀胱癌细胞建立荷瘤动物模型,随机分为实验组和实验对照组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗或者PBS,每组分2亚组,分别用于测量瘤质量、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况。结果经鉴定建立的以DC为基础的膀胱肿瘤疫苗具有典型DC形态学和表型特征。DC疫苗扩增到第5天,通过检测表面抗体显示CDllc高表达,但是CD80,CD86以及I-A低表达,提示为未成熟DC细胞。加入.LPS共同培养后第7天通过检测CD80,CD86以及I-A提示DC细胞成熟。培养至第5天的小鼠骨髓来源的未成熟DC和经照射获得的凋亡小鼠膀胱癌细胞及无血清共培养1天后,经过流式细胞仪测定显示未成熟DC细胞成为成熟的DC细胞。经过X射线照射三天后肿瘤细胞的凋亡达到最佳数目。负载辐射凋亡肿瘤细胞抗原的DC疫苗实验组荷瘤鼠肿瘤平均体积和平均瘤质量均显著低于对照组(P<0.01),生存期长于对照组,并且有2只小鼠无瘤长期存活。经DC疫苗实验组治愈的2只小鼠30天后无肿瘤生长,再次皮下接种MB49细胞观察30天仍无肿瘤发生。结论DC是功能最强大的抗原提呈细胞,负载辐射凋亡肿瘤细胞的DC疫苗对膀胱肿瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效应和生存期延长作用。我们建立的DC疫苗诱导的特异性CTL对MB49小鼠膀胱癌细胞建立荷瘤动物模型具有的很强的细胞毒活性。负载肿瘤抗原的DC疫苗可诱导机体产生并维持长期的肿瘤记忆性细胞免疫反应,对膀胱肿瘤细胞再次攻击具有免疫保护作用,在膀胱肿瘤复发预防中具有良好应用前景。充分说明以DC为中心的肿瘤生物治疗有望提高膀胱癌综合治疗水平。