【摘 要】
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目的1.试图构建Exo84p质粒表达载体,为体外乙酰化组蛋白是否可以与Exo84p结合做准备。2.制成组蛋白敲除/exo84-2变异菌株以观察DYN2基因内含子的剪接状况。方法:1.从酵母基因
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目的1.试图构建Exo84p质粒表达载体,为体外乙酰化组蛋白是否可以与Exo84p结合做准备。2.制成组蛋白敲除/exo84-2变异菌株以观察DYN2基因内含子的剪接状况。方法:1.从酵母基因中,经PCR扩增出所需的Exo84p,经纯化后用XmaⅠ酶切,琼脂糖凝胶回收后与pGEX-2T载体连接,导入感受态细胞DH5α中,挑选出正确的克隆。2.用PCR方法扩增出带LEU的基因片段,将扩增产物转入目的酵母X中,得到Exo84-2变异菌株。用RT-PCR技术检测Exo84-2突变体对DYN2基因第二外显子的保留/切除情况。结果我们构建出Exo84质粒与Exo84-2变异菌株,并在Exo84-2变异菌株的背景下观察DYN2基因第二外显子保留/剪接的情况。结论1实验成功构建出Exo84-2变异菌株。2在Exo84-2变异菌株中,DYN2基因第二外显子被保留的效率比野生型低。
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