葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定方法研究

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赭曲霉毒素A(Ochratoxin A ,简称OTA)是一种致癌性的毒素,对人类和动植物的危害较大。1993年,国际癌症研究机构将其定为2B类致癌物。据报道,葡萄与葡萄酒中含有OTA。随着人们对葡萄酒消费量的增加,开展葡萄酒中OTA的检测工作势在必行。目前,国外已有关于葡萄酒中OTA的限量标准及相应的标准检测方法。但是,国内关于葡萄酒中OTA的报道极少,缺乏葡萄酒中OTA的限量及其标准检测方法。因此,论文从葡萄酒中OTA的前处理和检测两个方面做出研究,目的在于建立葡萄酒中OTA的测定方法,从而为葡萄酒中OTA检测标准的建立提供依据。论文主要研究结果如下:(1)采用免疫亲和柱分离提纯葡萄酒中的OTA,提取液分别用高效液相色谱荧光检测法和荧光光度法检测,并对这两种检测方法进行比较。实验表明,高效液相色谱荧光检测法适用于葡萄酒样品中OTA的检测,且亦适用于葡萄皮超微粉中OTA的检测。荧光光度法结果呈现了假阳性,不适用于葡萄酒中OTA的检测。免疫亲和层析法选择性强,操作比较简单,但此方法成本极高。(2)对葡萄酒中赭曲霉毒素A的固相萃取方法(SPE)进行了研究,分析了固相萃取小柱(C18-SPE)的活化方法、淋洗液、洗脱溶剂对萃取葡萄酒中OTA的影响,选择出最佳的参数后进行精密度与准确度试验。建立了葡萄酒中赭曲霉毒素A的SPE法:C18-SPE经5 mL甲醇、5 mL双蒸水活化后,进样10 mL,先用1 mL双蒸水淋洗,充分干燥后,用5 mL乙酸乙酯洗脱,收集洗脱液并真空旋转蒸发至干,1 mL流动相溶解残渣待测。此方法的平均回收率为88.2%~100.9%,变异系数0.93%~2.19%,具有操作简单,成本低,分析速度快等优点。(3)通过对葡萄酒中OTA的测定,发现国内葡萄酒中存在OTA污染,但OTA含量远低于欧盟对葡萄与葡萄酒产品中OTA含量的最大限量2 ng/mL,我国葡萄酒比较安全。
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