苦参碱逆转T24/ADM细胞耐药性的研究

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目的:复苏T24/ADM细胞并检测其耐药性。观察苦参碱对T24/ADM细胞毒性以确定非毒性剂量的浓度范围。观察苦参碱对T24/ADM细胞抑制率和检测细胞P-gp的表达变化的影响,以探讨研究苦参碱对T24/ADM细胞耐药逆转的作用。方法:检测T24/ADM具有耐药性。将本导师组冻存的T24细胞与T24/ADM细胞进行复苏,复苏成功后加入阿霉素培养(药物浓度分别为0.0μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml)。倒置显微镜下观察细胞形态变化及生长情况。MTT法检测细胞对药物的耐受性,流式细胞术检测P-gp的表达。MTT法检测苦参碱对T24/ADM细胞的毒性作用。将苦参碱按不同浓度分组加入到T24/ADM测定其细胞毒性并确定非毒性浓度。实验组加入苦参碱(药物浓度分别为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml),对照组只加等体积的培养基不加药物。将非毒性浓度苦参碱按不同浓度分组(药物浓度分别为0.0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml),加入到T24/ADM测定各组细胞抑制率和检测细胞P-gp的表达变化并确定最佳逆转浓度。结果:检测T24/ADM的耐药性。在倒置显微镜下观察,T24/ADM与T24细胞形态特征明显变化。T24/ADM对ADM有明显的耐药性(IC50为7.37μg/ml), T24/ADM P-gp的表达明显增高。经方差分析,各浓度间差异有统计学意义(P<0.05)测定苦参碱对T24/ADM细胞毒性。通过剂量效应曲线可以确定苦参碱的非细胞毒性剂量(生长率>95%)为50μg/mL,因此把非细胞毒性剂量作为逆转浓度范围。苦参碱逆转试验及确定最佳逆转浓度。MTT法检测耐药细胞的抑制率,运用单因素方差分析得出A组(不加苦参碱)和B1组(10μg/ml)及B1组(10μg/ml)和B2组(20μg/ml)组间比较无统计学意义(P>0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测耐药细胞P蛋白表达,运用单因素方差分析得出B1组(10μg/ml)和B2组(20μg/ml)、B2组(20μg/ml)和B3组(30μg/ml)、B3组(3Oμg/ml)和UB4组(40μg/ml)组间比较无统计学意义(P>0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。并且确定苦参碱浓度为50μg/ml时逆转效果最大。结论:苦参碱对T24/ADM细胞有耐药逆转作用。
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