肺炎球菌性疾病是全球严重的公共卫生问题之一,也是导致中国儿童及成年人发病和死亡的重要原因。肺炎链球菌感染可引起细菌性肺炎、中耳炎和脑膜炎等疾病,其临床治疗用药以抗生素为主,由于抗生素的广泛应用,肺炎球菌的耐药性问题日益严重。采用肺炎球菌疫苗预防肺炎球菌性疾病或采用肺炎链球菌特异性抗体救治急性肺炎链球菌脓毒症患者,并减少细菌耐药性,尤为必要和迫切。肺炎链球菌溶血素（Pneumolysin,PLY）是肺炎链球菌的一种孔隙形成毒素,所有肺炎链球菌菌株均可表达,其在肺炎球菌肺损伤的炎症过程中起到重要作用。实验室前期研究中,成功筛选并制备靶向PLY的鼠源单克隆抗体2E5mab,验证其生物学活性及对肺炎链球菌感染小鼠的保护作用。本研究采用基因重组技术对鼠源抗体进行人源化改造,探究人源化抗体生物学活性及特性,为肺炎链球菌疾病的治疗奠定基础。通过大肠杆菌原核体系表达PLY蛋白,验证其生物学活性。将鼠源抗体的可变区与人源抗体的恒定区结合并合成质粒,通过真核体系表达纯化得到人鼠嵌合抗体,继续对人鼠嵌合抗体可变区中的4个框架区进行人源化,得到重链2E5zumab-VH0、2E5zumab-VH1、2E5zumab-VH2、2E5zumab-VH3和轻链2E5zumab-VL0,在通过真核表达体系进行表达纯化得到人源化抗体。Elisa验证抗体抗原亲和力,Western Blot鉴定人源化抗体特异性,抗溶血实验验证抗体的抗溶血活性,体内利用动物菌血症模型,观察小鼠生存率,HE染色检测肺组织损伤程度,Real Time PCR测定抗体热稳定性,并对药物代谢动力学进行研究。PLY蛋白在6.25ng时已具有较强的溶血活性;人鼠嵌合抗体2E5ximab与PLY蛋白亲和力较高,且具有较强抗溶血活性,对肺炎链球菌感染小鼠具有保护作用;通过交叉组合得到4组人源化抗体,2E5zumab-H0L0、2E5zumab-H1L0、2E5zumab-H2L0、2E5zumabH3L0,其中人源化抗体2E5zumab-H3L0亲和力和特异性高,抗溶血活性优于嵌合抗体,进一步对2E5zumab-H3L0体内药效进行验证,在等剂量的条件下,2E5zumab-H3L0体内药效等同甚至优于嵌合抗体,提高小鼠生存率,提前尾静脉给与2E5zumab-H3L0可以减少肺部组织炎性细胞浸润,2E5zumab-H3L0半衰期长,可达62.03h,结构稳定性高,Tm值为74.647℃。综上所述,本研究对鼠源抗体恒定区人源化,成功获得人鼠嵌合抗体2E5ximab,并对其鼠源可变区的框架区进一步人源化改造,得到人源化抗体2E5zumab-H3L0,成功验证其具有良好的亲和力、生物学活性和稳定性。