新长链非编码RNA630的发现及功能研究

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目的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株中新长链非编码RNA630的发现和功能研究。方法1、提取人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株RNA,建立测序文库,用Illumina HiSeqTM2000测序仪进行全转录组深度测序,优化测序数据,运用生物信息学方法将其与人类基因组数据库对比分析发现新的转录本,分析新转录本的序列和结构,筛选出长链非编码RNA630序列。2、RT-PCR检测长链非编码RNA630在不同组织和细胞中的表达谱。3、设计靶向长链非编码RNA630的小干扰RNA,用脂质体LipofectamineTM2000转染人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞。4、实时荧光定量PCR验证小干扰RNA对长链非编码RNA630的干扰作用。5、CCK8法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期。6、构建pEGFP-C1-630真核表达质粒并转染人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞。7、罗丹明123蓄积实验比较高表达长链非编码RNA630前后Jurkat细胞药物敏感性变化。结果1、630序列是一个新发现的长链非编码RNA,在人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞、人急性T淋巴细胞白血病Jurkat E6-1细胞、人早幼粒白血病细胞HL60细胞中高表达;在正常人多种组织cDNA文库、人横纹肌癌A673细胞、人鼻咽癌CNE细胞、人喉癌细胞、人食管癌ECA109细胞、人肺癌A549细胞、人原发性肝癌HepG2细胞、神经胶质瘤LN229和U87细胞中均不表达。2、小干扰RNA可下调长链非编码RNA630的表达量,抑制Jurkat细胞的增殖,诱导Jurkat细胞的凋亡,但对细胞周期未见明显影响。3、长链非编码RNA630可使Jurkat细胞的耐药功能增加。结论630序列是一个定位于人类3号染色体正义链的新转录本,其在多种血液肿瘤细胞中高表达,在正常组织不表达,是肿瘤相关性转录本。经生物信息学分析,证实630序列为一个新长链非编码RNA。经过初步验证,长链非编码RNA630可能参与人急性T淋巴细胞白血病的发生、发展,使Jurkat细胞的耐药性增加。
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