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多酚氧化酶（PolyphenolOxidase，PPO）是引起双孢蘑菇（Agaricusbisporus）褐变的关键酶，研究双孢蘑菇不同生长时期以及不同处理条件下PPO基因的表达情况是进一步研究PPO基因活性的基础。构建合适的双孢蘑菇遗传转化体系、提高转化率，为从分子水平上研究PPO基因以及双孢蘑菇其他功能基因提供有利工具，对双孢蘑菇遗传育种有着重要意义。本文研究了双孢蘑菇不同发育时期、不同处理下PPO基因表达的活性，建立了双孢蘑菇的高效转基因体系，并构建了双孢蘑菇PPO基因启动子的表达载体。以双孢蘑菇不同发育时期的子实体以及采后的双孢蘑菇在4℃贮藏条件下取样，提取双孢蘑菇的总RNA，并以18SrRNA为参照，利用半定量RT-PCR技术，对不同采样的双孢蘑菇中PPO基因mRNA的表达情况进行分析。双孢蘑菇中已克隆出的四种PPO基因即AbPPO1、AbPPO2、AbPPO3、AbPPO4，在双孢蘑菇发育的各个时期中表达情况分别为AbPPO1在双孢蘑菇各发育阶段表达情况基本一致，AbPPO2在发育中期较高，AbPPO3在成熟期较高，AbPPO4表达量逐渐增强。在4℃贮藏条件下，AbPPO1和AbPPO2表达量无明显变化，AbPPO3和AbPPO4随着贮藏时间的延长，先增加后减弱。克隆双孢蘑菇gpd强启动子，并利用gpd强启动子，置换植物双元表达载体pCambia1301中自带的花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子，构建适用于双孢蘑菇转化的表达载体pCghg，并导入农杆菌中。通过研究不同转化条件下的转化效率，建立农杆菌介导的双孢蘑菇的高效转基因体系。结果表明，在农杆菌侵染菌液浓度OD600nm为0.05、侵染时间30min、预培养时乙酰丁香酮（Acetosyringone，AS）浓度为200μmol、共培养24h的条件下，转化效率最高，可达70%以上。根据双孢蘑菇PPO3序列，设计特异引物，克隆双孢蘑菇PPO3启动子，并置换表达载体pCambia1301中CaMV35S启动子构建表达载体pCghP3，并根据表达载体pCghg成功转化双孢蘑菇建立的转基因体系，将表达载体pCghP3转入双孢蘑菇中，实现外源基因PPO3启动子在双孢蘑菇中的表达，为研究双孢蘑菇启动子的表达活性提供了有利工具。