【摘 要】
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CONSTANS-like（COL）基因在植物开花调节中起重要作用。课题组前期研究发现芒果中存在4种类型的CO/COL基因,本研究主要对第Ⅳ类CO基因进行研究,以四季蜜芒（Mangifera indica L.cv.‘Si Ji Mi’）为材料,通过基因克隆、表达模式分析和转基因功能分析来研究芒果CONSTANS-like（Mi COL）Ⅳ类基因在芒果成花和逆境中的作用,主要结果如下:1.克隆获得
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CONSTANS-like（COL）基因在植物开花调节中起重要作用。课题组前期研究发现芒果中存在4种类型的CO/COL基因,本研究主要对第Ⅳ类CO基因进行研究,以四季蜜芒（Mangifera indica L.cv.‘Si Ji Mi’）为材料,通过基因克隆、表达模式分析和转基因功能分析来研究芒果CONSTANS-like（Mi COL）Ⅳ类基因在芒果成花和逆境中的作用,主要结果如下:1.克隆获得6个芒果Mi COLⅣ类基因:命名为Mi COL1A、Mi COL1B、Mi COL6、Mi COL7A、Mi COL7B、Mi COL17,其开放阅读框（ORF）分别为852 bp、822 bp、681 bp、1 056 bp、1 017 bp、1 023bp,蛋白质保守结构均只含CCT结构域。2.荧光定量法检测了芒果6个Mi COLⅣ类基因在四季蜜芒叶、茎、花中表达特性,Mi COL1A、Mi COL6在叶中表达较高,Mi COL1B、Mi COL7A、Mi COL7B、Mi COL17在茎中的表达量较高;不同花发育时期检测发现,Mi COL1A、Mi COL1B、Mi COL17在成花诱导期表达量最高,Mi COL6、Mi COL7A、Mi COL7B在花器官发育早期期的表达量最高;日周期检测表明Mi COL1B不具有昼夜节律性,Mi COL1A、Mi COL6、Mi COL7A、Mi COL7B和Mi COL17具有昼夜节律性。3.在300 mmol/L Na Cl处理条件下,Mi COL1A、Mi COL1B、Mi COL6、Mi COL17和Mi COL7B的表达量出现明显上调,而Mi COL7A的表达量出现明显下调。在30%PEG的处理条件下,芒果Mi COLⅣ类基因表达量均出现明显上调。在2℃低温处理的条件下,Mi COL1A、Mi COL1B、Mi COL7A和Mi COL7B的表达量出现明显下调,而Mi COL17的表达量出现明显上调。在50 mg/L赤霉素和800 mg/L多效唑处理后,Mi COL1A、Mi COL1B、Mi COL6、Mi COL7A、Mi COL7B和Mi COL17对照和在赤霉素和多效唑处理条件下表达模式相同,但表达量有所不同。4.分别构建Mi COL1A、Mi COL1B、Mi COL6、Mi COL7A、Mi COL7B和Mi COL17基因的超量表达载体,花序浸染法转化拟南芥,提取转基因株系的DNA来筛选鉴定阳性株系。T3代转基因株系经长日照和短日照处理,结果显示:Mi COL1A、Mi COL1B、Mi COL6、Mi COL7A、Mi COL7B和Mi COL17的过表达拟南芥在长日照条件下延迟开花,在短日照条件下,与对照的花期一致;转基因拟南芥的内源At FT基因的表达量受到抑制,进而延迟开花。
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