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目的:本课题旨在研究磁性纳米四氧化三铁(Nano-Fe<,3>O<,4>)及纳米金(Nano-Au)单独及结合柔红霉素(DNR)应用对人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02凋亡的影响,并测定编码P糖蛋白(P-gp)的多药耐药(MDR)基因mRNA的表达水平,以探讨它们逆转MDR的作用机理,为载药纳米粒作为耐药逆转剂的临床应用提供理论依据。
方法:
(1)采用甲基四唑蓝法(MTT)法检测DNR,Nano-Fe<,3>O<,4>或Nano-Au单独作用于K562/A02细胞和K562细胞48h对细胞的增殖影响,计算出其IC50。
(2)采用溶剂扩散法制备纳米粒,选取了多个纳米材料浓度(6.25%,12.5%,25%,50%,V/V)和多个DNR浓度(0.05mg/L,0.1mg/L,10mg/L,20mg/L)进行组合干预K562/A02和K562细胞,采用MTT测定细胞增殖,选取抑制效果最佳组。
(3)采用25%纳米材料(5.0x10<*>-7M Nano-Fe<,3>O<,4>或者2.0×10<*>-8M Nano-Au)和10mg/L DNR结合物干预K562/A02细胞48h,另外设有lOmg/L DNR单药组,并用流式细胞仪(FCM)和共居焦荧光显微镜检测细胞内DNR浓度、细胞凋亡、采用半定量PCR(RT-PCR)测定细胞MDRl基因mRNA表达水平。
结论:
(1)载药纳米粒可促进DNR进入细胞内,提高细胞内DNR浓度以杀死K562/A02细胞。
(2)K562细胞MDR1 mRNA表达为阴性,K562/A02细胞MDR1 mRNA表达为阳性,Nano-Fe<,3>O<,4>、Nano-Au纳米材料本身不能下调K562/A02细胞的MDRl基因的表达,但载药纳米粒可明显下调MDR1基因的表达,能明显逆转K562/A02的耐药性,差异具有显著性。