论文部分内容阅读
中国水仙（Narcissus Tazetta L. var. chinensis Roem）隶属石蒜科水仙属,多年生草本植物,是多花水仙的一个变种。水仙是我国十大传统名花之一,在我国主要分布在福建漳州,上海崇明,浙江舟山等地,以漳州水仙最负盛名。但由于中国水仙繁殖速度慢,品种单一,且退化严重,不能满足市场需求,严重限制了中国水仙的进一步发展。所以对水仙品种的改良迫在眉睫。 本研究以中国水仙为材料,在建立高效再生体系的基础上,初步建立了中国水仙的遗传转化体系和离体辐射诱变体系,为建立水仙品种改良技术体系提供研究基础。主要研究结果如下: 1.采用55～60℃的无菌热水处理2min不仅可以使污染率降低到5%以下,而且有效防止了组培过程中的褐化,使外植体的分化率和增殖系数大大提高;不同来源的外植体分化能力不同,冷处理40d的水仙鳞茎的鳞茎盘是组织培养的首选材料,冷处理不仅可以提高鳞茎盘的分化率,而且缩短了分化所需时间。 2.适合带鳞片叶的鳞茎盘丛生芽诱导的诱导培养基为MS+BAP 10mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L,分化培养基MS+BAP 5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖40g/L,分化率达100%,增殖培养基为MS+BAP 5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖40g/L,适合丛生芽成苗的培养基是MS+BAP3mg/L+NAA 0.2mg/L+PP333 5～10 mg/L+蔗糖30g/L,适合生根的培养基是MS+NAA 0.1mg/L+蔗糖15g/L,生根率达100%;从鳞茎盘和鳞片叶均可以诱导得到愈伤组织,适合鳞茎盘愈伤组织诱导的培养基为MS+BAP 10mg/L+2,4-D 0.5mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L,愈伤诱导率和分化率都达到100%,适合鳞片叶愈伤组织诱导的培养基为MS+BAP 10mg/L+NAA 1.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L+蔗糖40g/L。 3.冷处理降低了水仙鳞茎的总糖、蔗糖以及淀粉含量,还原糖和可溶性蛋白含量显著升高,POD、CAT活性也显著升高,这些生理变化可能与冷处理后的鳞茎盘分化所需时间缩短与分化能力增强有关;处于分化不同时期的鳞茎盘的抗氧化酶活性以及可溶性蛋白含量随培养时间的延长,均表现为先升高后降低的变化趋势,在接种后6～10d达到峰值,与鳞茎盘分化过程中的细胞学观察结果相结合,可以初步确认抗氧化酶活性和可溶性蛋白含量的规律性变化,与鳞茎盘的分化相关。 4.探讨了5种抗生素对中国水仙离体培养反应的影响:用转化pBI 1301空载体的农杆菌转化预培养7d的带鳞片叶的鳞茎盘,建立了较完善的中国水仙的遗传转化体系。在3种抑菌抗生素中,200mg/L头孢霉素的抑菌效果最好,且对外植体的分化率和增殖系数影响不大;外植体对潮霉素的反应比卡那霉素反应敏感,35mg/L的潮霉素即可使未经转化的外植体完全不分化;对经转化后恢复培养3d的外植体进行GUS染色,瞬时表达水平达到100%。 5.接种7d的鳞茎盘最适合作为水仙离体诱变的材料,其致死剂量为50～60Gy,半致死剂量15～20Gy,最适合水仙辐射诱变;试管小鳞茎致死剂量为50Gy,半致死剂量为25Gy:部分