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目的:葡甘露聚糖凝胶是一种由中药白及、积雪草、蛇床子提取物制成,为治疗妇科炎症而正在进行研制的复方中药新药。本课题在前期研究的基础上,对工艺和组成改进后的药物进行药效学研究,首先第一部分通过建立小鼠耳肿胀模型观察葡甘露聚糖凝胶对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制效果以及耳组织中炎性因子含量的变化以探究其抗炎效果;第二部分通过建立大鼠混合感染性阴道炎模型,探究葡甘露聚糖凝胶对阴道炎的治疗效果;第三部分通过建立大鼠宫颈炎模型,探究葡甘露聚糖凝胶对宫颈炎的治疗作用,同时初步探讨其发挥抗炎作用的机制是否与MKP-1的表达有关。方法:(1)采用二甲苯刺激致炎法复制小鼠耳肿胀模型,以观察葡甘露聚糖凝胶的抗炎作用。以葡甘露聚糖凝胶高、中、低(2.5、1.3、0.6g·kg-1)剂量进行阴道内灌注给药7天后,将二甲苯均匀地涂于小鼠右耳的内、外两侧面,而左耳则不涂,计算由二甲苯引起的耳肿胀率;采用酶联免疫吸附剂测定法检测各组小鼠耳组织中TNF-α、IL-6、IL-1β含量。(2)选用阴道内注射金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌三种混合菌液的方法建立大鼠混合感染性阴道炎模型,观察葡甘露聚糖凝胶对大鼠混合感染性阴道炎的治疗作用;以葡甘露聚糖凝胶高、中、低(1.2、0.6、0.3g·kg-1)剂量进行阴道内灌注给药7天后,采用酶联免疫吸附剂测定法检测各组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、EGFR的含量;并取大鼠阴道黏膜组织进行病理形态学检查。(3)采用阴道深部注射苯酚胶浆的方法建立大鼠宫颈炎模型,观察葡甘露聚糖凝胶对大鼠宫颈炎的治疗作用;以葡甘露聚糖凝胶高、中、低(1.2、0.6、0.3g·kg-1)剂量进行阴道内灌注给药7天后,采用酶联免疫吸附剂测定法检测各组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、EGFR的含量;将大鼠宫颈组织取出进行病理形态学检查;运用RT-PCR法对宫颈组织中MKP-1 mRNA的表达变化进行检测;运用Western blotting法对宫颈组织中MKP-1蛋白的表达变化进行检测。结果:(1)葡甘露聚糖凝胶对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响:(1)耳肿胀抑制率:模型组小鼠耳肿胀率明显升高(P<0.01)。与模型组相比,葡甘露聚糖凝胶各给药组和复方甲硝唑阴道栓组的小鼠耳肿胀率均明显降低(P<0.01);凝胶基质组与模型组无明显差异(P>0.05)。(2)酶联免疫吸附测定法检测小鼠耳组织中炎性细胞因子含量的变化:与空白组相比,模型组小鼠耳组织中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量均显著升高(P<0.01);与模型组相比,葡甘露聚糖凝胶各剂量组与复方甲硝唑阴道栓组的小鼠耳组织中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量均有不同程度降低(P<0.01或P<0.05)。(2)葡甘露聚糖凝胶对大鼠混合感染性阴道炎模型的影响:(1)酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8含量的变化:与空白组相比,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的含量均明显升高(P<0.01)。与模型组相比,葡甘露聚糖凝胶各剂量组和复方甲硝唑阴道栓组大鼠血清中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的含量均明显下降(P<0.01),凝胶基质组与模型组无明显差异(P>0.05)。(2)酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中EGFR含量的变化:与空白组相比,模型组大鼠血清中EGFR的含量均明显降低(P<0.01);与模型组相比,葡甘露聚糖凝胶各剂量组和复方甲硝唑阴道栓组大鼠血清中EGFR的含量均明显升高(P<0.01),凝胶基质组与模型组无明显差异(P>0.05)。(3)阴道黏膜组织病理形态学检查:光镜(200倍、40倍)下观察,模型组阴道黏膜固有层水肿,结缔组织排列疏松,伴较多炎性细胞散在浸润,与空白组相比,炎症反应明显加重。葡甘露聚糖凝胶给药组阴道被覆鳞状上皮,上皮细胞排列紧密,形态正常,固有层胶原丰富,排列紧密,见极少量炎性散在浸润。(3)葡甘露聚糖凝胶对苯酚胶浆致大鼠宫颈炎模型的影响:(1)酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8含量的变化:与空白组相比,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的含量均明显升高(P<0.01);与模型组相比,葡甘露聚糖凝胶各剂量组和复方甲硝唑阴道栓组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的含量有不同程度下降(P<0.01或P<0.05);凝胶基质组与模型组无明显差异(P>0.05)。(2)酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中EGFR含量的变化:与空白组相比,模型组大鼠血清中EGFR的含量均明显降低(P<0.01);与模型组相比,葡甘露聚糖凝胶各剂量组和复方甲硝唑阴道栓组大鼠血清中的EGFR含量有不同程度的升高(P<0.01或P<0.05);凝胶基质组与模型组无明显差异(P>0.05)。(3)宫颈组织病理形态学检查:光镜(200倍、40倍)下观察,模型组宫颈被覆鳞状上皮,上皮层可见少量中性粒细胞散在浸润,固有层胶原丰富,排列紧密,可见较多炎性细胞散在浸润,包括中性粒细胞、淋巴细胞等,与空白组比较,炎症反应轻度加重。葡甘露聚糖凝胶给药组宫颈被覆鳞状上皮,形态正常,固有层胶原丰富,排列紧密,可见少量炎性细胞散在浸润。(4)RT-PCR及Western blot检测结果:(1)RT-PCR法检测宫颈组织中MKP-1mRNA表达的变化:与空白组相比,模型组大鼠宫颈组织中MKP-1 mRNA的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比,葡甘露聚糖凝胶给药组大鼠宫颈组织中MKP-1mRNA的表达有不同程度的提高(P<0.01或P<0.05)。(2)Western blot法检测宫颈组织中MKP-1蛋白表达的变化:与空白组相比,模型组大鼠宫颈组织中MKP-1蛋白的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比,葡甘露聚糖凝胶给药组大鼠宫颈组织中MKP-1蛋白的表达有不同程度的提高(P<0.01或P<0.05)。结论:1、通过建立小鼠耳肿胀模型,诱导小鼠产生急性炎症状态,对比给药组与模型组的小鼠耳肿胀度以及耳组织中炎性因子的含量,表明葡甘露聚糖凝胶具有良好的抗炎效果。2、通过建立大鼠混合感染性阴道炎模型,检测大鼠血清中炎性因子含量、EGFR含量的变化以及大鼠阴道粘膜组织的病理形态学变化,表明葡甘露聚糖凝胶对阴道炎有良好的治疗效果。3、通过建立大鼠宫颈炎模型,检测大鼠血清炎性炎性因子含量的变化、EGFR含量的变化、大鼠宫颈组织的病理形态学变化以及宫颈组织中MKP-1 mRNA和蛋白的表达,表明葡甘露聚糖凝胶在对宫颈炎具有良好的治疗效果,且炎症反应的改善可能与促进MKP-1的表达有关。