Hsulf-1过表达对肺腺癌细胞系A549凋亡的影响并老年肺癌病例分析

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早期肺癌多不易被发现,临床中许多患者确诊已是中晚期,错过了最佳手术时机,所以多采用传统化疗及放疗方法治疗肿瘤疾病。但由于传统放化疗方法自身的局限性,肿瘤的治疗效果并不十分理想,因此,探索新的治疗方案是目前肿瘤研究的热点。目的:利用转染技术诱导Hsulf-1在肺腺癌细胞系A549中过表达,观察其对细胞凋亡的影响,探讨Hsulf-1在抑制细胞生长、促进细胞凋亡中的作用。为Hsulf-1能否成为临床肺癌治疗的新方法提供实验依据。分析老年肺癌病例,证实体检对肺癌的早期诊断与及时诊断具有重要的临床价值。方法:人工合成质粒以诱导Hsulf-1在肺腺癌细胞系A549中过表达,应用脂质体LipofectamineT M2000将合成的携带Hsulf-1的质粒转染到肺腺癌A549细胞内,在相差倒置显微镜下观察转染48小时后细胞形态学变化;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测不同转染细胞组之间Hsulf-1mRNA的表达差异;应用免疫印迹法(Westernblot)技术检测不同转染细胞组之间Hsulf-1蛋白的表达差异;应用流式细胞术检测不同转染细胞组之间凋亡率的差异。选择老年肺癌病例进行分析,并与术后病理结果对比,探讨影像学检查对早期发现肺癌的临床意义。结果:将人工合成携带Hsulf-1的质粒通过脂质体LipofectamineT M2000转染入肺腺癌细胞系A549并成功表达后,肿瘤细胞的生长状态受到明显抑制,同时凋亡增加。相差倒置显微镜观察转染前后形态变化:转染前,细胞贴壁生长情况良好,细胞形态呈扁平样,向四周伸出多个突起,细胞内可见圆形细胞核,核仁一至多个;转染后48小时,细胞呈现凋亡形态,贴壁不佳,漂浮细胞增多,核膜破裂,细胞皱缩成团,突起消失。RT-PCR检测Hsulf-1mRNA的表达,结果表明经过质粒转染的A549细胞,Hsulf-1的mRNA表达水平明显上调,分别对比空白对照组、阴性对照组Hsulf-1mRNA的表达水平,转染组的上调变化有统计学差异。说明携带Hsulf-1基因的质粒可特异性提高Hsulf-1mRNA在细胞中的表达。Western blot检测Hsulf-1蛋白的表达,结果表明,转染组Hsulf-1蛋白的表达水平在质粒转染A549细胞48小时后明显提高,分别对比空白对照组、阴性对照组Hsulf-1蛋白的表达水平,转染组的上调变化有统计学差异。说明携带Hsulf-1基因的质粒可特异性提高Hsulf-1蛋白在细胞中的表达。流式细胞术检测细胞凋亡率:结果显示空白对照组(0.58±0.21)%,阴性对照组(0.74±0.13)%,转染组(19.53±0.32)%,说明Hsulf-1过表达可使细胞凋亡增加。病例的75%其影像学结果与病理报告一致,体检可以作为早期发现肺癌的重要手段。结论:通过转染质粒靶向提高Hsulf-1基因在肺腺癌细胞系A549中的表达水平可使A549细胞凋亡明显增加,同时细胞生长受到抑制,Hsulf-1可能成为治疗肺癌的一个新的基因靶点。影像学发现有小结节表现的患者,可长期随诊,对于近期突然进行性变化需警惕癌变可能。体检对于早期发现肺癌有重要意义。
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