目的:研究油橄榄叶提取物指纹图谱与抑制酪氨酸酶活性的关系,确定关联度最大的活性成分,进行其抑制酪氨酸酶活性及黑色素生成的机理机制研究,为其开发利用提供实验数据及理论支持。方法:1.油橄榄叶提取物抑制酪氨酸酶活性成分分析。采用HPLC法建立油橄榄叶提取物的指纹图谱,利用LC-MS/MS进行共有峰归属确认;分光光度法测定多巴醌吸光度,计算酪氨酸酶抑制率;运用灰色关联度分析法分析指纹图谱共有峰与酪氨酸酶活性的关联度,确定影响最大的活性成分。2.橄榄苦苷抑制酪氨酸酶活性的机理研究。采用分光光度法测定多巴醌的吸光度,计算酪氨酸酶抑制率,通过Lineweaver-Burk双倒数作图法计算酪氨酸酶的Km和Vm值,研究橄榄苦苷对酪氨酸酶的抑制作用及作用机理。3.橄榄苦苷对B16细胞黑色素生成的机制研究。选用B16小鼠黑色素瘤细胞进行实验,设立对照组、不同浓度橄榄苦苷组和曲酸阳性组。（1）MTT法测定B16细胞活力,NaOH裂解法测定B16细胞黑色素含量,多巴氧化法测定B16细胞酪氨酸酶活力;（2）蛋白免疫印迹（Western blot）法测定B16细胞裂解液中相关蛋白表达水平,包括c AMP通路中的CREB、p-CREB,MAPK通路中的ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK,MITF、Tyrosinase、TRP-1、TRP-2等蛋白的表达水平。4.橄榄苦苷对斑马鱼酪氨酸酶活性及黑色素生成的影响。选用野生型AB系成年斑马鱼进行实验,设立对照组、不同浓度橄榄苦苷组、曲酸及PTU阳性对照组。利用斑马鱼自主抽动、心率及死亡率指标选择浓度用于后续研究;NaOH裂解法测定斑马鱼黑色素含量,多巴氧化法测定斑马鱼酪氨酸酶活力。结果:1.油橄榄叶提取物抑制酪氨酸酶活性成分分析。9个油橄榄叶提取物样品对酪氨酸酶均有一定的抑制活性,在油橄榄叶提取物指纹图谱中共确定了6个共有峰,其中,2号峰为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷,4号峰为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷,5号峰为橄榄苦苷。5个共有峰的关联度大于0.6,5号峰橄榄苦苷对抑制酪氨酸酶活性影响最大（关联度为0.8895）。2.橄榄苦苷对酪氨酸酶抑制活性的机理研究。橄榄苦苷能显著抑制酪氨酸酶活性,其IC50为0.210 mmol/L。Lineweaver-Burk双倒数图表明橄榄苦苷对酪氨酸酶的作用表现为非竞争性抑制类型,抑制常数（Ki）为6.77 mmol/L。3.橄榄苦苷对B16细胞黑色素生成的机制研究。（1）与对照组相比,橄榄苦苷在0～200μmol/L间对B16细胞活力无显著性差异（P＞0.05）。橄榄苦苷浓度为100、150和200μmol/L时,对B16细胞黑色素生成有显著的抑制作用（P＜0.05）,抑制率分别为10.09%±2.83%、19.60%±4.33%、33.43%±1.44%;对B16细胞酪氨酸酶活性有显著的抑制作用（P＜0.05）,抑制率分别为11.66%±5.69%、20.81%±6.80%、32.20%±3.11%。（2）与对照组相比,橄榄苦苷干预后,各剂量组CREB蛋白磷酸化水平均显著降低（P＜0.05）,各剂量组ERK1/2蛋白磷酸化水平均显著增加（P＜0.05）,中、高剂量组JNK蛋白磷酸化水平均显著降低（P＜0.05）,MITF、Tyrosinase、TRP-1及TRP-2蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。4.橄榄苦苷对斑马鱼酪氨酸酶活性及黑色素生成的影响。以斑马鱼功能指标为评价标准,选择2、3、4和5 mmol/L橄榄苦苷为实验浓度;橄榄苦苷浓度为3、4、5 mmol/L时,对斑马鱼黑色素生成有显著的抑制作用（P＜0.05）,抑制率分别为10.31%±1.35%、18.63%±0.90%、32.05%±2.72%;橄榄苦苷浓度为4、5 mmol/L时,对斑马鱼酪氨酸酶活性有显著的抑制作用（P＜0.05）,抑制率分别为14.01%±1.97%、16.24%±2.10%。结论:橄榄苦苷是油橄榄叶提取物中对酪氨酸酶抑制活性影响最大的化合物,橄榄苦苷对酪氨酸酶的抑制作用表现为可逆的非竞争性,对B16细胞和斑马鱼酪氨酸酶活性和黑色素生成有显著的抑制作用。橄榄苦苷可通过抑制酪氨酸酶活性、影响MAPK和c AMP信号通路来抑制黑色素生成。