目的1观察中药复方苍柏湿毒清治疗支原体性宫颈炎(气虚湿毒证)的临床疗效。2观察中药复方苍柏湿毒清干预BALB/C小鼠建立阴道感染UU动物模型效果。3从BALB/c(?)小鼠血IL-2水平、阴道黏膜组织IL-12和LTC4水平、阴道黏膜组织C3b受体表达方面探讨中药复方苍柏湿毒清治疗解脲支原体泌尿生殖道感染的可能免疫调节机制。方法本课题研究分两部分进行：1临床研究采用随机双盲对照的研究方法,将苍柏湿毒清颗粒和热淋清颗粒加工成外包装一样的制剂统一编盲,入选支原体性宫颈炎(气虚湿毒证)患者按就诊先后顺序随机发药。治疗期间,患者均服用中药颗粒剂每次一袋,每日两次,疗程两周。用药前、用药2周后记录中医证候积分；用药前、用药2周后、停药1周、3周检测阴道pH值、宫颈分泌物白细胞计数、支原体培养,最终以判断疗效,实验结束后统一揭盲。2实验研究70只BALB/c(?)小鼠随机分为A1-1组10只、A1-2组10只、B1组10只、A2-1组10只、A2-2组10只、B2组10只、C组10只。2.1实验一2.1.1A1-1组、A1-2组经过中药苍柏湿毒清低剂量、高剂量干预7天后,B1组无干预7天后,分别对三组BALB/c小鼠建立阴道感染UU动物模型4周实验结束后取各组小鼠阴道分泌物进行UU培养,计算UU定植成功率,观察中药干预后解脲支原体定植情况。2.1.2中药苍柏湿毒清对建立阴道感染UU动物模型干预的免疫机制研究。①采用ELISA法,在实验结束后检测三组BALB/c小鼠血白介素-2(IL-2)值。②采用ELISA (?)去,在实验结束后检测三组BALB/c小鼠阴道黏膜组织白介素-12(IL-12)和白三烯C4(LTC4)含量。③采用免疫组织化学技术对三组BALB/c小鼠阴道粘膜C3b受体进行染色,选择有意义的组织相,应用计算机图像处理系统后期处理,每例测5个视野,由计算机计算出所测阳性反应物相对含量的灰度‘值及面积即平均光密度(MOD)。2.2实验二2.2.1A2-1组、A2-2组、B2组BALB/c小鼠先建立阴道感染UU动物模型4周,其后A2-1组、A2-2组经过中药苍柏湿毒清低剂量、高剂量干预7天,B2组无中药干预7天,实验结束后取各组小鼠阴道分泌物进行UU培养,计算UU定植成功率,观察中药干预后解脲支原体定植情况。2.2.2中药苍柏湿毒清对BALB/c小鼠阴道感染UU动物模型干预的免疫机制的研究。①采用ELISA法,在实验结束后检测三组BALB/c小鼠血IL-2。②采用ELISA法,在实验结束后检测三组BALB/c小鼠阴道黏膜组织IL-12和LTC4含量。③采用免疫组织化学技术对三组BALB/c小鼠阴道粘膜C3b受体进行染色,选择有意义的组织相,应用计算机图像处理系统后期处理,每例测5个视野,由计算机计算出所测阳性反应物相对含量的灰度值及面积即平均光密度(MOD)2.3C组为空白组,不进入实验一、二,实验一、二结束后与其他六组同时取阴道分泌物进行UU培养及各项指标检测。结果1临床研究1.1观察支原体性宫颈炎(气虚湿毒证)患者66例,苍柏湿毒清组33例患者中14例痊愈,6例显效,5例进步,8例无效,愈显率60.6%；热淋清组33例患者中8例痊愈,4例显效,6例进步,15例无效,愈显率36.4%。苍柏湿毒清组在治疗支原体性宫颈炎方面愈显率(60.6%)高于热淋清组(36.4%),两组有显著性差异(P<0.05)。苍柏湿毒清组在治疗支原体性宫颈炎(气虚湿毒证)疗效优于热淋清组。1.2苍柏湿毒清组治疗后患者阴道pH值逐步下降,并趋于正常水平,热淋清组治疗后患者阴道pH值有所下降,并未达到正常值。苍柏湿毒清组在改善阴道pH值方面优于热淋清组。1.3治疗后,两组患者宫颈分泌物白细胞计数均较治疗前极显著性下降(P<0.01),苍柏湿毒清组治疗后比热淋清组白细胞计数下降更明显。苍柏湿毒清组在降低宫颈分泌物白细胞计数方面优于热淋清组。1.4治疗后,两组患者中医证候评分较治疗前显著性下降(P<0.05),苍柏湿毒清组比热淋清组下降更明显(P.<0.05)。苍柏湿毒清组在中医证候改善方面优于热淋清组。2实验研究2.1UU血清4型致病性实验二,29只BALB/c小鼠建立阴道感染UU动物模型结束后,对A2-1组、A2-2组、B2组BALB/c小鼠用无菌男用拭子取阴道分泌物,UU培养结果均为阳性,阳性定植率100%,提示UU血清4型可致BALB/c小鼠阴道感染。2.2成功建立了BALB/c小鼠阴道感染UU的动物模型对BALB/c小鼠采用颈部皮下注射雌二醇注射液0.2mg,每周一次,共四周；在第二次注射雌二醇注射液(即第二周)后,每天用无菌输液软管向BALB/c小鼠阴道注入预先制备的UU标准株菌液2O μ1(105CCU/ml),连续注入三天；此方法成功建立了BALB/c小鼠阴道感染UU的动物模型。2.3实验质控条件良好C组实验入组时、结束时UU阳性率均为0%,提示实验质控条件良好。2.4UU定植成功率实验一、二结束时,对A1-1组、A1-2组、B1组、A2-1组、A2-2组、B2组、C组BALB/c小鼠阴道分泌物进行UU培养,UU感染阳性率分别是70.00%(7/10)、66.67%(6/9)、90%(9/10)、66.67%(6/9)、70.00%(7/10)、100%(10/10)、0%(0/10)。实验一A1-1组、A1-2组小鼠经过苍柏湿毒清干预,部分实验小鼠阴道UU定植阴性。实验二A2-1组、A2-2组成功建立阴道感染UU的动物模型后,经过苍柏湿毒清干预,部分实验小鼠阴道感染UU转阴。但经统计学分析,六组组间UU阳性定植率比较,统计学上无显著性差异(P>0.05)。2.5血IL-2实验一、二结束时,七组BALB/c小鼠血IL-2值由高到低依次是A1-1组(54.16±1.52)、A1-2组(51.86±1.51)、A2-1组(45.33±1.82)、A2-2组(44.45±2.75)、C组(44.02±2.14)、B1组(41.29±1.35)、B2组(35.40±1.78)。B1组、B2组BALB/c小鼠建立阴道感染UU动物模型血IL-2值低于C组(空白组),统计学上,有显著性差异(P<0.05),提示UU感染后BALB/c小鼠血IL-2值呈低水平实验一A1-1组、A1-2组小鼠经过苍柏湿毒清干预后再建立动物模型,可提高血IL-2值；统计学上,与C组、B1组均有显著性差异(P<0.05)。提示苍柏湿毒清可提高小鼠血IL-2水平,在防UU感染中发挥重要作用。实验A2-1组、A2-2组成功建立阴道感染UU的动物模型后经过苍柏湿毒清干预,提示苍柏湿毒清可提高UU感染小鼠血IL-2的低水平,统计学上,与B2组有显著性差异(P<0.05),与C组无显著性差异(P>0.05),在抗UU感染中发挥重要作用。苍柏湿毒清提高小鼠血IL-2水平,增加TH1细胞,激活或调动体液免疫功能,从而在防UU感染和抗UU感染中发挥重要作用。2.6阴道黏膜组织IL-12实验一、二结束时,七组BALB／c小鼠阴道黏膜组织IL-12由高到低依次是B2组(19.37±14.22)、B1组(18.41±13.23)、A2-2组(12.52±3.96)、A2-1组(12.06±4.92)、A1-1组(9.32±2.88)、C组(9.21±5.92)、A1-2组(7.52±3.25)。B1组、B2组BALB／c小鼠建立阴道感染UU动物模型阴道黏膜组织IL-12值高于C组(空白组),统计学上,有显著性差异(P<0.05),提示UU感染后阴道黏膜组织IL-12值呈高水平。实验一A1-1组、A1-2组小鼠经过苍柏湿毒清干预后再建立动物模型,可降低阴道黏膜组织IL-12值；统计学上,与B1组有显著性差异(P<0.05),与C组无显著性差异(P>0.05)。提示苍柏湿毒清可降低阴道黏膜组织IL-12水平,在防UU感染中发挥重要作用。实验二A2-1组、A2-2组成功建立阴道感染UU的动物模型后经过苍柏湿毒清干预,可降低阴道黏膜组织IL-12值,统计学上,与B2组、C组无显著性差异(P>0.05),提示苍柏湿毒清降低UU感染小鼠阴道黏膜组织IL-12的高水平作用不显著。苍柏湿毒清降低小鼠阴道黏膜组织IL-12水平,在防UU感染中发挥重要作用,在抗UU感染中作用不显著。2.7阴道黏膜组织LTC4实验一、二结束时,七组BALB／c小鼠阴道黏膜组织LTC4由高到低依次是B2组(485.61±387.36)、B1组(399.88±297.61)、A2-1组(288.54±113.48)、A2-2组(244.91±52.65)、A1-1组(198.90±54.36)、C组(172.71±75.44)、A1-2组(162.77±66.84)。B1组、B2组BALB／c(?)小建立阴道感染UU动物模型阴道黏膜组织LTC4值高于C组(空白组),统计学上,有显著性差异(P<0.05),提示UU感染后阴道黏膜组织LTC4值呈高水平。实验一A1-1组、A1-2组小鼠经过苍柏湿毒清干预后再建立动物模型,可降低阴道黏膜组织LTC4值；统计学上,与B1组有显著性差异(P<0.05),与C组无显著性差异(P>0.05)。提示苍柏湿毒清可降低阴道黏膜组织LTC4水平,在防UU感染中发挥重要作用。实验二A2-1组、A2-2组成功建立阴道感染UU的动物模型后经过苍柏湿毒清干预,可降低阴道黏膜组织LTC4值,统计学上,与B2组有显著性差异(P<0.05),与C组无显著性差异(P>0.05),提示苍柏湿毒清降低UU感染小鼠阴道黏膜组织LTC4的高水平,在抗UU感染中发挥重要作用。苍柏湿毒清降低阴道黏膜组织LTC4的水平,可控制血管通透性,减少炎症渗出,保持阴道粘膜屏障完整,可大大减少UU入侵途径,从而在防UU感染和抗UU感染中发挥重要作用。2.8BALB/c小鼠阴道黏膜组织C3b受体实验一、二结束时,七组BALB/c小鼠阴道黏膜组织C3b受体平均光密度(MOD),结果：A1-1组(0.038±0.013)、A1-2组(0.045±0.087)、A2-1组(0.039±0.011)、A2-2组(0.042±0.009)、B1组(0.041±0.009)、B2组(0.042±0.012)、C组(0.042±0.010),七组BALB/c(?)小鼠阴道黏膜组织C3b受体平均光密度差异不显著(P>0.05),提示苍柏湿毒清可能不是通过调节C3b受体起到免疫调节作用。结论中药复方苍柏湿毒清在治疗支原体性宫颈炎(气虚湿毒证)疗效优于热淋清颗粒,苍柏湿毒清能够有效地降低阴道pH值,并趋向正常,减少宫颈分泌物白细胞计数,以保持局部黏膜完整；中药复方苍柏湿毒清有明显地改善全身及局部症状的作用,具有较强抗支原体的作用。经过苍柏湿毒清干预,部分实验小鼠阴道uu定植阴性；成功建立阴道感染uu的动物模型后,经过苍柏湿毒清干预,部分实验小鼠阴道感染uu转阴。苍柏湿毒清能够提高小鼠血IL-2,降低小鼠降低阴道黏膜组织IL-12,降低小鼠阴道黏膜组织LTC4,可能不是通过调节小鼠阴道黏膜组织C3b受体起到免疫调节作用,该方在防uu感染和抗uu感染中发挥重要作用。本课题创新点是首次从小鼠血IL-2、阴道黏膜组织IL-12和LTC4、阴道黏膜组织C3b受体水平探讨中药复方苍柏湿毒清在防uu感染和抗uu感染两方面的免疫调节机制。