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实验目的乳腺癌(BreastCancer)是现今女性最常见的恶性肿瘤之一,作为一个特殊的乳腺癌亚型,三阴性乳腺癌(TNBC)侵袭力强、易复发和转移。寻找合适靶点提高TNBC的化疗敏感性是其研究的关键。X染色体连锁的泛素特异性蛋白酶9(usp9x)是一种编码泛素特异性蛋白酶的基因,在包括TNBC在内的多种肿瘤内高表达,其编码的去泛素化酶usp9x作为一种对蛋白泛素化起到逆向调节作用的重要调节因子在肿瘤的发生发展中起了关键作用,能调节靶基因的转录,控制肿瘤细胞生长、分化及凋亡。随着对泛素化酶usp9x研究的深入,其在肿瘤耐药中的作用被逐渐提出。本研究的目的就是观察usp9x在三阴性乳腺癌对顺铂耐药性中的作用及其可能机制。材料与方法本研究用顺铂处理MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三种乳腺癌细胞株,利用细胞活力检测试剂盒(CCK-8)检测乳腺癌癌细胞系的细胞活力,细胞增殖检测试剂盒(EdU试验)检测乳腺癌细胞系的增殖情况,蛋白免疫印迹技术(Western-blot)内usp9x蛋白的表达情况。用usp9x抑制剂WP1130抑制乳腺癌细胞株内usp9x的活性,研究单纯顺铂处理和进行顺铂和usp9x抑制剂WP1130联合处理后,MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三种细胞株细胞活力、增殖情况以及细胞内usp9x蛋白的表达情况的变化。用usp9x siRNA干扰乳腺癌细胞系内usp9x的表达,研究单纯顺铂处理和进行顺铂和usp9xsiRNA联合处理后,MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三种细胞株细胞活力的变化,以及usp9x siRNA干扰乳腺癌细胞系内usp9x的表达再联合usp9x抑制剂WP1130处理后MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三种细胞株细胞活力的变化。为探讨usp9x影响乳腺癌耐药的机制,我们在检测各种处理下MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三种细胞株中内usp9x的表达情况的同时也检测了三种细胞株中抗凋亡蛋白Mcl-1的表达情况,并分析了 Mcl-1变化与usp9x表达的关系。结果实验结果发现:(1)顺铂处理后,三种乳腺癌细胞株的细胞活力及增殖情况均下降,乳腺癌细胞系对顺铂的敏感性与usp9x的表达高低负相关;(2)联合应用usp9x活性抑制后,ER阴性的乳腺癌细胞株的细胞活力、增殖情况以及usp9x的表达均下降,即乳腺癌细胞系对顺铂的敏感性增加,而ER阳性的细胞株不受影响;(3)siRNA敲除usp9x后,usp9x的表达均下降,ER阴性的乳腺癌细胞株对顺铂的敏感性增加,而ER阳性的细胞株不受影响;(4)siRNA敲除usp9x后再行usp9x活性抑制处理,则不能增加三种乳腺癌细胞系对顺铂的敏感性(5)usp9x活性抑制处理和siRNA敲除usp9x处理后三种细胞株内usp9x的表达变化与抗凋亡蛋白Mcl-1蛋白的表达变化正相关。结论:uSp9x的高表达会明显降低乳腺癌细胞对顺铂的敏感性。通过降低乳腺癌细胞系内usp9x的活性或抑制乳腺癌细胞系内usp9x的表达,均可以显著增加ER阴性的乳腺癌细胞对顺铂的敏感性,但不能影响ER阳性的乳腺癌细胞对顺铂的反应。uSp9x可能通过影响抗凋亡蛋白Mcl-1途径影响ER阴性的乳腺癌细胞系对顺铂的敏感性。