[目的]UFM修饰是一种蛋白质翻译后修饰,在细胞发育和维持组织动态平衡都起着至关重要的作用。课题组通过对C57小鼠的肝脏组织进行规模化的蛋白质组学分析,结合自制的UFM1抗体,通过高分辨率质谱鉴定UFM修饰蛋白和修饰位点。这次规模化鉴定内源性UFM修饰蛋白的工作为人们研究UFM修饰的功能和机制提供更多实验依据。[方法]1.根据UFM1的特性设计UFM1抗体。2.通过IP(免疫沉淀)和WB(免疫印迹)验证自制UFM1抗体的有效性和特异性。3.对C57小鼠的肝脏组织进行质谱前的处理,包括裂解,酶解和IP(免疫沉淀)。4.对数据进行蛋白质组学分析。5.验证UFM修饰蛋白。[结果]1.自制UFM1抗体较商业化UFM1抗体相比其特异性和有效性都存在优势。2.通过高分辨率质谱总共鉴定到178个UFM修饰蛋白的203个修饰位点。3.数据库中鉴定到RPL26这一个已知的UFM修饰蛋白,修饰位点K132和K134与报道吻合。4.生物信息学分析表明UFM修饰不仅仅定位于内质网中,在线粒体内也有大量富集,可能与细胞代谢中的氧化还原过程存在着很密切的联系。5.本课题组根据UFM修饰蛋白和位点的规律提出“ExxxK”保守模体。[结论]1.设计并制备能够富集UFM1修饰肽段的抗体,可以在组织水平规模化鉴定UFM修饰位点。2.UFM化修饰可能与氧化还原代谢相关,并且UFM1的修饰位点可能存在保守模体。