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目的：研究黄芪总苷的主要有效成分黄芪甲苷和三七总皂苷的主要有效成分人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1及其配伍抗CoCl2诱导的PC12细胞氧化损伤的有效配伍剂量,并主要从氧化应激和细胞凋亡的线粒体途径初步研究其机制。方法：1：采用经神经生长因子(NGF)转分化的PC12细胞作为神经细胞,以氯化钴诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,以细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率为指标,研究4种有效成分对PC12细胞氧化损伤的有效抑制浓度。在此基础上按U8*(85)均匀设计实验,确定4种有效成分的有效配伍剂量。2：实验细胞分为空白组(只加无血清培养基600μ1),乙醇-PBS组(加入50%的乙醇-PBS60μL+无血清培养基540μL),COCl2损伤组(加入终浓度为600μmol/L的CoCl260μL+无血清培养基540μL),乙醇-PBS-CoCl2组(加入50%的乙醇-PBS60μL+无血清培养基480μL3h后+终浓度为600μmol/L的CoC1260μL),人参皂苷Rg1组(加入无血清培养基480μL+人参皂苷Rg160μL作用3h,再加入终浓度为600μmol/L的CoCl260μL),人参皂苷Rb1组(加入无血清培养基480μL+人参皂苷Rb160μL作用3h,再加入终浓度为600μmol/LCoCl260μL),三七皂苷R1组(加入无血清培养基480μL+三七皂苷R160μL作用3h,再加入终浓度为600μmol/L的CoCl260μL),黄芪甲苷组(加入无血清培养基480μL+黄芪甲苷60μL作用3h,再加入终浓度为600μmol/L的CoCl260μL),阳性对照药依达拉奉组(加入无血清培养基480μL+终浓度为20μmoL/L依达拉奉60μL作用3h,再加入终浓度为600μmol/L的CoCl260μL),有效成分配伍方组(加入无血清培养基480μL+有效成分配伍方60gL,再加入终浓度为600μmol/L的CoCl260μL),以终浓度为5μg/mLHoechst33258试剂进行荧光染色,在荧光显微镜下摄取5个不重复视野,计算5个视野的凋亡细胞数和总细胞数,计算凋亡率。3：细胞同2进行分组处理后,加入终浓度为10μmol/1DCFH-DA染液进行荧光染色,在荧光显微镜下随机选取5个不重复视野摄片,测定其绿色荧光强度,以平均荧光强度定量细胞内活性氧(ROS)。4：细胞同上进行分组处理后,以100μg/LRh123进行荧光染色,在荧光显微镜下随机选取5个不重复视野摄片,测定其绿色荧光强度,以平均荧光强度定量线粒体膜电位(MMP)。结果：1.4种有效成分都能抑制(?)CoCl2诱导的PC12细胞LDH的漏出(P<0.05)。且随着药物浓度的增加,对LDH漏出率的抑制作用增强。黄芪甲苷和人参皂苷Rb1在50μmol/L,人参皂苷Rg1和三七皂苷R1在100μmol/L浓度时LDH漏出抑制率约为80%。U8*(85)均匀设计实验多元逐步回归分析得：4种有效成分的8个不同浓度配伍都能抑制CoC12诱导的PC12细胞LDH的释放(P<0.05)。人参皂苷Rgl50μmol/L、黄芪甲苷0.78125μmol/L、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1各1.5625μmol/L配伍时抗PC12细胞氧化损伤的效应最强。2：与空白组比较,CoCl2和CoCl2-乙醇刺激组凋亡率明显上升(P<0.01)。应用4种有效成分及其配伍均能降低细胞凋亡率(P<0.01)与黄芪甲苷、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1组比较,有效成分配伍组抗细胞凋亡的作用增强(P<0.01),与人参皂苷Rg1组比较,显著性不明显(P>0.05)3：与空白组比较,CoCl2和CoCl2-乙醇刺激组DCF平均荧光强度明显增强(P<0.01),有效成分配伍组和各成分组和阳性药物依达拉奉均能不同程度的降低经CoCl2和CoCl2-乙醇刺激后细胞内DCF的荧光强度(P<0.01),与四种有效成分组比,有效成分配伍组不具显著性。4：与空白组比较,CoCl2组和CoCl2-乙醇刺激组平均荧光强度明显下降(P<0.01),4种有效成分单独使用可使平均荧光强度稍微上升,不具显著性(P>0.05),有效成分组平均荧光强度显著升高(P<0.01)。结论：人参皂苷Rgl50μmol/L、黄芪甲苷0.78125μmol/L、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1各1.5625μmol/L配伍组方具有抗PC12细胞氧化损伤的效应,其机制与抗细胞凋亡,升高线粒体膜电位和抑制细胞活性氧的释放有关。