论文部分内容阅读
藻蓝蛋白(C-PC)是存在于藻类细胞中的光合辅助色素蛋白。它不仅可作为天然色素应用于食品、化妆品等行业，而且能提高机体的免疫功能，清除体内的自由基，促进动物血细胞再生，在癌症、溃疡等疾病的防治上亦卓有成效。本文研究了藻蓝蛋白的分离纯化、酶解和藻蓝蛋白及其酶解物的体外抗肿瘤活性，并对其抗肿瘤机理进行了初步探讨。
钝顶螺旋藻藻粉经反复冻融和超声破碎处理，离心后上清液经过盐析、透析得到藻蓝蛋白粗提液。采用羟基磷灰石(HA)两步柱层析法对粗提液分离，得到纯度A620/A280>4.0的藻蓝蛋白。
采用四因素、三水平正交试验，以MTT的实验结果为指标，优化胰蛋白酶和胃蛋白酶对藻蓝蛋白的酶解条件，得到的四个优化酶解条件为：(A):温度:40℃:pH:8；[胰蛋白酶]/[藻蓝蛋白]:1/10；时间:60分钟。(B)温度：37℃；pH：8；[胰蛋白酶]/[藻蓝蛋白]:1/30；时间：90分钟。(C)：温度：40℃；pH:3；[胃蛋白酶]/[藻蓝蛋白]:1/20；时间：30分钟。(D)温度:33℃:pH:0.5.[胃蛋白酶]/[藻蓝蛋白]:1/10；时间：30分钟。
采用MTT法研究藻蓝蛋白及其酶解物对宫颈癌细胞Hela和黑色素瘤细胞B16的体外生长抑制作用。实验表明：藻蓝蛋白对肿瘤细胞的抑制作用有明显的剂量效应，当藻蓝蛋白的浓度达到100μg/ml时，对Hela和B16的抑制率分别达到26.3％和19.1％，但对正常细胞人肾上皮细胞293T没有明显的影响。藻蓝蛋白酶解物的抗肿瘤活性明显高于相同浓度下的藻蓝蛋白。当选用酶解条件(A)时，藻蓝蛋白酶解物对Hela细胞的抑制率达到43.2％，对B16细胞的抑制率为23.2％。酶解条件为(B)时，藻蓝蛋白酶解物对Hela细胞的抑制率为28.3％，对B16细胞的抑制率则达到了46.4％。酶解条件为(C)时，藻蓝蛋白酶解物对Hela细胞的抑制率达到45.1％，对B16细胞的抑制率为7.8％。酶解条件为(D)时，藻蓝蛋白酶解物对Hela细胞的抑制率为39.8％，对B16细胞的抑制率则达到45.6％。由此的出结论：不同酶解条件下得到的酶解物对不同肿瘤细胞的抑制作用有很大的差异。
用酶解条件为(B)时得到的藻蓝蛋白酶解物处理B16细胞，经Hochst33258荧光染色和比色法检测凋亡蛋白酶Caspase-3活性，研究藻蓝蛋白酶解物的抗肿瘤机理。研究发现，藻蓝蛋白酶解物处理B16细胞24小时后，细胞发生明显凋亡，Caspase-3活性达到最高。得出结论，藻蓝蛋白及其酶解物可能是通过激活Caspase-3家族蛋白诱导肿瘤细胞凋亡。