EpCAM-ING1-CART在三阴性乳腺癌及卵巢癌中的治疗作用研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jlckyang123
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目的:研究EpCAM-ING1-CART在三阴性乳腺癌及卵巢癌中的治疗作用。方法:免疫组化检测三阴性乳腺癌组织中EpCAM及EGFR抗原的表达差异,以及EpCAM在癌旁组织中的表达水平。流式细胞术检测不同人乳腺癌细胞系之间EpCAM的表达差异以及卵巢癌细胞系SKOV3的EpCAM表达情况。针对EpCAM抗原的Exon2序列设计CAR,称为EpCAM-ING1-CAR。慢病毒系统构建EpCAM-ING1-CAR阳性表达的T细胞,流式细胞术检测EpCAM-ING1-CAR的表达情况。流式细胞术分析杀伤效应,ELISA实验检测IFN-γ的释放量。细胞免疫荧光检测恶性浆膜腔诱导后的SKOV3是否发生EMT变化。结果:免疫组化结果显示EpCAM和EGFR在三阴性乳腺癌组织中均高表达,而Ep CAM表达尤为显著。Western Blot和流式细胞术提示EpCAM在MDA-MB-468细胞及SKOV3细胞中表达水平较高。MDA-MB-231细胞部分表达EpCAM抗原。ELISA实验证实EpCAM-ING-1-CART与MDA-MB-468及SKOV3共培养时,其IFN-γ的释放量高于Control-T。在三阴性乳腺癌细胞治疗中,流式细胞术显示EpCAM-ING-1-CART可有效杀伤高表达EpCAM抗原的MDA-MB-468细胞,而对低表达EpCAM的MDA-MB-231细胞也具有杀伤作用。细胞免疫荧光证实恶性浆膜腔积液诱导后,SKOV3会发生EMT变化。流式细胞术分析显示,EpCAM-ING1-CART既可杀伤SKOV3细胞,也可杀伤发生EMT变化后的SKOV3细胞。结论:EpCAM-ING1-CART对三阴性乳腺癌及卵巢癌均有治疗作用。
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