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流感病毒属于正粘病毒科，是一种能引起人和动物流行性感冒的囊膜病毒，其基因组由8条单股负链RNA组成。流感病毒核糖核蛋白复合体（vRNP）是病毒复制与转录的基本单位，其中聚合酶PB2亚基对于病毒的转录起始以及病毒的宿主嗜性都发挥着重要作用。 NEDD8是一种类泛素分子。其参与蛋白质翻译后修饰的过程被称为NEDDylation修饰，功能非常广泛。PB2能够发生磷酸化及泛素化修饰，但是目前还没有关于PB2 NEDDylation修饰的报道。 本研究发现A型流感病毒PB2蛋白能够发生NEDDylation修饰。E3连接酶XIAP能够显著增强PB2 NEDDylation修饰程度。通过免疫印迹及噬斑实验，我们发现细胞中过表达的XIAP，能够抑制病毒蛋白的表达并降低病毒的滴度。而敲低XIAP则有利于病毒蛋白表达及病毒复制，回补XIAP则减弱敲低XIAP对病毒复制的影响。此外通过RT-PCR和免疫印迹实验，我们证明细胞过表达NEDD8能够降低流感病毒基因的转录及病毒蛋白的表达。同时我们还发现DeneddylaseNEDP1能够减弱PB2的NEDDylation修饰。 通过定点突变以及质谱分析，我们定位了PB2 K699是其主要的NEDDylation修饰位点。为了研究PB2 NEDDylation修饰对流感病毒复制的影响，我们通过反向遗传学构建了PB2-K699R突变型流感病毒(WSN-PB2 K699R)。我们发现WSN-PB2 K699R病毒在A549细胞及MDCK细胞中的增殖速度都快于WSN病毒。细胞水平的实验表明过表达的NEDD8只能抑制野生型流感病毒(WSN)蛋白的表达及病毒滴度，而对突变型流感病毒WSN-PB2 K699R没有明显作用;利用流感病毒特异性启动子报告基因细胞系，我们发现WSN-PB2 K699R病毒复制效率明显高于WSN病毒。 我们还比较了野生型PB2以及PB2-K699R的稳定性，结果表明PB2-K699R的半衰期要比野生型PB2的半衰期长。通过小鼠感染模型，我们检测病毒感染的小鼠的体重、生存率、肺中病毒滴度及病理损伤情况，结果显示WSN-PB2 K699R对小鼠的致病性要强于WSN病毒。这些结果表明PB2 NEDDylation修饰负调控流感病毒复制。 综上，我们的研究揭示流感病毒聚合酶亚基PB2能发生NEDDylation修饰，且该修饰能够降低PB2的稳定性，进而抑制流感病毒复制。