表达一个HMW-GS亚基Dy12的六倍体小麦创制

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普通小麦品种一般表达3-5个HMW-GS,且Glu-D1的两个亚基通常都表达,因此很难研究表达3个以下HMW-GS时对小麦品质的影响。利用只表达节节麦D基因组的2个HMW-GS的人工合成小麦与Dx沉默的表达3个HMW-GS的四川地方小麦材料WL16杂交,通过SDS-PAGE对自交F2和F3进行鉴定,筛选出了只表达1个HMW-GS Dy12的六倍体小麦材料。对筛选出的材料进行了根尖染色体计数、花粉母细胞减数分裂观察,同时也对Dx沉默的分子机制进行了研究,主要结果如下:1.从随机选取的1000粒F2种子中筛选到了只表达1个HMW-GS Dy12的六倍体小麦47粒,成活42粒。根尖染色体计数显示,29粒为42条,4粒在39-41之间,其余的计数失败致染色体数目不清楚。2.对42个F3家系的1000粒种子进行HMW-GS检测发现,39个家系的被检测种子均只含Dy12,其余3个家系(P3、P7、P468)的种子共检测到7粒未表达HMW-GS.28个家系的根尖染色体为42条,8个家系39-41条之间,其余计数失败。38个F3家系的花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ染色体配对构型出现了不同数量的单价体和棒状二价体,其中P715的单价体和棒状二价体频率最高,分别达15.66和7.81个,高频率单价体可能是该家系结实少的的主要原因。部分F3家系减数分裂后期也出现了落后染色体。3.F3中4粒成活的未表达HMW-GS种子3粒根尖染色体数目为39-41条,花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ染色体配对构型均出现较低频率的单价体和棒状二价体,后期出现了落后染色体。单条1D或1D在内的2-3条染色体缺失可能是导致染色体41条的材料HMW-GS表达量减少而未检测和染色体数39-40条的未检测到HMW-GS的主要原因。4.对四川地方小麦材料WL16的1Dx基因编码区及上游序列克隆、测序和比对表明:1Dx沉默的主要原因可能是1453bp处的C/T突变,致编码谷氨酰胺的密码子CAG突变为编码终止密码子的TAG所致。
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