第一部分 临床研究基于因子 分析的糖尿病肾脏病证候要素研究目的研究早期、临床期糖尿病肾脏病的证候要素分布,并探索其发生、发展的演变特点,为糖尿病肾脏病中医诊疗提供依据。方法采用横断面研究的方法建立糖尿病肾脏病四诊信息数据库,使用因子分析方法将相关性较强的中医四诊信息变量归为同一类,提取公因子,采用朱文峰教授《证素辨证学》结合专家评价,辨别公因子所属证候要素,并脏腑定位。依据因子得分系数计算每位患者证候要素的相应公因子得分,据此判别每位患者所具有的全部证候要素。根据因子旋转后的载荷值计算每位纳入患者的证候要素公因子得分,把分值最高的证候要素作为该患者的主要证素。结果早期糖尿病肾脏病共提取12个公因子,经过同类合并归纳辨别,早期糖尿病肾脏病的证候要素表现为虚实两端,虚者为气虚、血虚、阴虚、阳虚,实者为血瘀、痰邪、湿邪、风邪,病位在脾、肾、肝、胃、肺,全部证候要素分布从高到低依次为气虚84.8%,阴虚70.9%,湿邪69.6%,血虚67.7%,阳虚57%,血瘀55.7%,痰邪41.8%,风邪39.9%,主要证候要素分布从高到低依次为气虚28.5%,阳虚19.6%,湿邪15.2%,阴虚12.7%,血瘀7%,痰邪7%,风邪6.3%,血虚6%。临床期糖尿病肾脏病共提取11个公因子,经过同类合并归纳辨别,临床期糖尿病肾脏病的证候要素也表现为虚实两端,虚者为气虚、血虚、阴虚、阳虚,实者为血瘀、痰邪、湿邪、风邪,病位在心、脾、肾、肝、胃、肺,全部证候要素分布从高到低依次为气虚74.5%,湿邪70.8%,血瘀64.6%,阴虚62.1%,风邪44.7%,阳虚42.9%,痰邪39.1%,血虚33.5%,主要证候要素分布从高到低依次为阳虚18%,风邪24%,气虚14.3%,湿邪13.0%,血虚11.8%,阴虚10.6%,血瘀9.9%,痰邪7.5%。结论早期、临床期糖尿病肾脏病病性均为虚实两端,虚者可见气血阴阳俱虚,尤以气虚为著,实者为血脉瘀阻,痰湿内蕴,风邪伏络,尤以痰湿瘀结明显。针对糖尿病肾脏病发病的核心病机,治疗在益气化瘀散结基础上,重视应用祛风除湿通络治法。第二部分实验研究基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路糖尿病肾病“从风论治”机制研究目的糖尿病肾病是糖尿病引起的肾脏损害,临床诊断称之为糖尿病肾脏病,病理诊断称之为糖尿病肾小球硬化症。本研究基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路介导的免疫炎症反应在糖尿病肾病发病机制中的重要影响,通过检测p-PI3K、p-Akt、PTEN、NF-κB、MCP-1的蛋白及mRNA表达情况,探讨益气祛风通络颗粒对该信号通路的作用,从而揭示糖尿病肾病“从风论治”的机制。方法采用高热量高脂饲料喂养并单侧肾切除的糖尿病肾病GK大鼠动物模型,将所有入选GK大鼠按随机数字表分为模型组、假手术组、益气组、祛风通络组、益气祛风通络组,灌胃8周,于实验起始、第4周、第6周、第8周计算24h尿蛋白定量,分别评估益气药生黄芪、祛风通络方、益气祛风通络方的疗效。灌胃8周后检测肝肾功能,评估各组药物对肝肾功能的影响。采用HE、Masson染色方法,观察GK大鼠肾脏组织病理切片,并检测p-PI3K、p-Akt、PTEN、NF-κB、MCP-1的蛋白及mRNA表达情况,进而探讨益气祛风通络药物对该信号通络的作用机制。结果实验一,在实验开始阶段,各组大鼠24h尿蛋白定量差异无统计学意义。药物干预第4周,与模型组相比,各组24h尿蛋白定量均减少,其中益气组、益气祛风通络组有显著统计学差异(P<0.01),祛风通络组有统计学差异(P<0.05),余无统计学意义：与益气祛风通络组相比,益气组24h尿蛋白定量减少,祛风通络组增加,但均无统计学意义。药物干预第6周,与模型组相比,各组24h尿蛋白定量均减少,其中益气组有显著统计学差异(P<0.01),祛风通络组、益气祛风通络组有统计学差异(P<0.05),余无统计学意义；与益气祛风通络组相比,益气组、祛风通络组24h尿蛋白定量均减少,但均无统计学意义。药物干预第8周,与模型组相比,各组24h尿蛋白定量均减少,其中益气组有统计学差异(P<0.05),益气祛风通络组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计学意义；与假手术组相比,治疗组24h尿蛋白定量均减少,其中益气祛风通络组有统计学差异(P<0.05),余无统计学意义；与益气祛风通络组相比,益气组、祛风通络组24h尿蛋白定量均升高,其中祛风通络组有统计学差异(P<0.05)。8周后肝肾功能检测结果,与模型组相比,各组SCr水平均降低,假手术组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计学意义。实验各组GLU、ALT、AST水平差异无统计意义。实验二,免疫组化检测p-PI3K、p-Akt、PTEN、NF-κB、MCP-1表达情况,与模型组相比,各组p-P13K水平表达均减少,但只有益气祛风通络组有统计学差异(P<0.05)；与益气祛风通络组相比,益气组p-PI3K水平表达减少,祛风通络组p-PI3K水平表达增多,但均无统计学意义。与模型组相比,各组p-Akt水平表达均减少,但只有益气祛风通络组有统计学差异(P<0.05)。与益气祛风通络组相比,益气组、祛风通络组p-Akt水平表达均增多,但均无统计学意义。与模型组相比,各组PTEN水平表达均增加,祛风通络组、益气祛风通络组有统计学差异(P<0.05),余无统计学意义；与益气祛风通络组相比,益气组、祛风通络组PTEN水平表达均减少,但均无统计学意义。各组NF-κB、MCP-1表达水平差异无统计学意义。Western blot检测检测肾脏组织p-PI3K、p-Akt、 PTEN、NF-κB、MCP-1蛋白表达结果,与模型组相比,各组p-PI3K蛋白表达水平均减少,其中治疗组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计学意义；与益气祛风通络组相比,益气组p-PI3K蛋白表达水平表达增多,祛风通络组表达减少,但均无统计学意义。与模型组相比,各组p-Akt蛋白表达水平均减少,其中益气组、祛风通络组有统计学差异(P<0.05),益气祛风通络组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计学意义；与益气祛风通络组相比,益气组、祛风通络组p-Akt蛋白表达水平表达增多,但均无统计学意义。各组肾组织PTEN蛋白表达差异无统计学意义。与模型组相比,各组NF-κB蛋白表达水平均减少,其中益气组、祛风通络组、益气祛风通络组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计学意义；与益气祛风通络组相比,益气组、祛风通络组NF-κB蛋白表达水平表达均增多,有显著统计学差异(P<0.01)。与模型组相比,假手术组MCP-1蛋白表达水平增多,其他组MCP-1蛋白表达水平均减少,其中益气组、益气祛风通络组有显著统计学差异(P<0.01),祛风通络组有统计学差异(P<0.05)；与益气祛风通络组相比,益气组、祛风通络组MCP-1蛋白表达水平表达均增多,但均无统计学意义。PCR实验结果显示,与模型组相比,各组PI3K mRNA表达均减少,其中治疗组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计学意义；与模型组相比,假手术组Akt mRNA表达增多,治疗组表达减少,假手术组、益气组、祛风通络组有统计学差异(P<0.05),益气祛风通络组有显著统计学差异(P<0.01)：与模型组相比,各组PTEN mRNA表达均减少,治疗组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计学意义；与益气祛风通络组相比,益气组、祛风通络组PI3K mRNA、Akt mRNA、PTEN mRNA表达均增加,但无统计意义。与假手术组相比,各组NF-κB mRNA表达均减少,治疗组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计学意义；与假手术组相比,各组MCP-1mRNA表达均减少,祛风通络组有统计学差异(P<0.05),益气祛风通络组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计学意义,与益气祛风通络组相比,益气组、祛风通络组MCP-1 mRNA表达均增加,益气组有显著统计学差异(P<0.01),余无统计意义。结论1高热量高脂饲料喂养并单侧肾切除GK大鼠是糖尿病肾病较理想的动物模型,其优势在于使用自发性2型糖尿病动物模型,并单侧肾切除,较好地模拟了糖尿病肾病发病机制。2与单用黄芪或单独使用祛风通络颗粒相比,益气祛风通络颗粒可降低糖尿病肾病动物模型大鼠24小时尿蛋白含量,并且随着用药时间的延长,疗效逐渐明显。3益气祛风通络颗粒治疗糖尿病肾病动物模型的机制可能是通过降低p-PI3K、p-Akt、 NF-κB、MCP-1蛋白及mRNA表达水平来调控糖尿病肾病大鼠PI3K/Akt/NF-κB信号通路,减轻肾脏损伤,作用较单用黄芪或祛风通络颗粒明显。