嗜酸喜温硫杆菌(Acidithiobacillus caldus,简称A.caldus)是一种嗜酸,中温,化能自养菌,能够氧化还原性无机硫化物获得能量和还原力,是浸矿环境中的优势菌群,其硫氧化能力和抗逆能力决定着浸矿效率的高低。本文以喜温硫杆菌硫代谢中重要酶组分连四硫酸盐水解酶TetH(tetrathionate hydrolase)和全局调控因子RpoS为切入点,分别研究它们在硫代谢中重要作用和在环境压力下的调控作用,为提高嗜酸喜温硫杆菌的浸矿能力奠定理论基础。本论文主要从以下3个方面展开。首先,不同情况下RT-qPCR稳定内参基因的确定。通过对实验室已有生物芯片数据分析和文献查阅,确定了 6个常用的潜在内参基因rrs、era、map、alas、rpoc和gapdh。分别在不同硫源和不同环境压力下培养获得不同样品,进行RT-PCR,以Ct值为基础,运用内参基因分析软件geNorm、normfinder和Bestkeeper对6个基因的稳定性进行分析排序,获得最稳定的基因或组合。稳定内参基因的确定为开展A.caldus转录水平的研究提供了有利条件。其次,系统研究了连四硫酸盐水解酶(thiosulfatequinoneoxidoreductase,TetH)在连四硫酸盐代谢途径(S4I代谢途径)和整个硫代谢中作用。通过基因无痕敲除技术获得tetH敲除株,并对其菌落形态、生长状态、转录数据和代谢产物进行分析,根据有关结果对TetH功能进行定位,发现TetH是S4I途径的核心,是A.caldu中连四硫酸盐代谢的唯一酶类;S4I途径作为A.alldus硫代谢网络的组成部分,在单质硫培养过程中不起核心作用,是对硫代硫酸盐代谢的补充。S4I途径与细胞质中的硫代谢途径关系密切。最后,探索了全局调控因子sigma38(RpoS)在环境适应中的调控作用。构建了rpoS 敲除株,并对突变株在不同环境压力下的生长进行初步研究,发现突变株在有机质、渗透压、低pH等条件下生长发生明显差异,推测rpoS在该过程发挥重要调控作用,为进一步探究rpoS在环境压力和抗逆中的调控机制奠定了基础。