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目的:研究不同浓度二妙散对类风湿关节炎(RA)动物模型胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠NF-κBp50和ERK1/2表达的影响。方法:通过构建CIA模型,采用不同浓度二妙散对CIA大鼠灌胃治疗,60只雌性SPF级Wistar大鼠随机分为空白对照、模型组以及低中高剂量二妙散组,每周记录大鼠体重和关节评分,灌胃6周后麻醉,进行X线检测,腹主动脉采血后脱颈处死,Elisa检测血清中IL-6、TNF-α和IL-10水平变化。取大鼠关节,HE染色观察大鼠关节组织病理改变,通过qRT-PCR和Western Blot检测大鼠关节中NF-κBp50和ERK1/2mRNA水平和蛋白水平表达,免疫组织化学技术对NF-κBp50和ERK1/2在大鼠关节中定位分析。结果:1.成功构建CIA大鼠模型。2.RA炎性指标、病理及X线检测结果(1)CIA大鼠初次免疫7 d大鼠的后足与空白组大鼠无明显差异,加强免疫14~42 d发现除空白组外其余大鼠后足均出现明显肿胀。与模型组相比较,二妙散治疗组在14~42 d的给药治疗过程中肿胀程度有所缓解。(2)21 d后CIA大鼠体重随时间增长差异不显著(P>0.05),极显著低于空白对照组(P<0.01);二妙散对CIA大鼠体重影响,与空白对照组比较,其余各组体重均随时间存在下降趋势,造模期体重差异不明显,成模期,体重明显降低(P<0.05)。除空白对照组外,各组体重随饲养时间增加均未增重,说明均受到病情影响,在各时间点,二妙散不同浓度治疗组体重均无明显差异(P>0.05)。(3)各组关节炎评分均明显低于模型组(P<0.05)。14 d大鼠关节炎评分显示,各实验组均显著高于空白对照组(P<0.05);随时间增长,模型组关节炎评分升高,二妙散组关节炎评分均显著降低(P<0.05),中浓度二妙散组显著降低更为明显(P<0.01)。(4)空白对照组的IL-6和TNF-α水平低于模型组(P<0.05),IL-10水平高于模型组(P<0.05)。与模型组比较,二妙散给药组IL-6和TNF-α水平均降低,IL-10水平均升高。模型组IL-10与低浓度和中浓度二妙散组相较,显著升高(P<0.05),中浓度二妙散组IL-6和TNF-α与模型组相比,显著降低(P<0.05)。(5)空白对照组大鼠关节表面被覆薄层透明软骨,关节囊腔光滑,表面覆有薄层滑膜细胞。模型组关节滑膜细胞增生,间质充血水肿、炎细胞浸润,关节软骨有一定程度的破坏,关节腔变形。二妙散治疗组与模型组比较关节滑膜增生和关节软骨破坏均出现一定程度的缓解,与空白对照组比较仍然出现关节滑膜细胞增生,间质充血水肿、炎细胞浸润,关节软骨有一定程度的破坏,关节腔变形。中浓度二妙散组缓解显著,明显可以看到正常软骨组织。(6)通过X线片结果观察,正常对照组大鼠关节面光滑,上下关节面结构清晰,关节完整,骨质未出现破坏现象,关节间隙正常,软组织无肿胀。与正常比较发现CIA模型组大鼠关节及足趾出现软组织肿胀,关节面融合,关节间隙变窄及消失,结构不清晰,出现了严重的骨质吸收和溶解现象,关节已经基本损毁,再次验证CIA大鼠模型构建成功。二妙散干预治疗组间差异不显著,与正常组比较大鼠关节及足趾仍出现软组织肿胀、关节间隙变窄,关节出现损坏,与CIA模型组比较软组织肿胀程度、关节面结构和间隙的清晰程度以及关节的破坏程度均得到缓解。3.大鼠关节组织中NF-κBp50、ERK1和ERK2 mRNA和蛋白水平(1)各组大鼠关节组织中NF-κBp50、ERK1和ERK2 mRNA水平相对定量分析结果显示,NF-κBp50、ERK1和ERK2 mRNA在不同实验组大鼠关节组织中均有不同程度的表达。CIA大鼠关节中NF-κBp50、ERK1和ERK2 mRNA相对表达量极显著高于其他实验组(P<0.01),中浓度二妙散组大鼠关节组织中NF-κBp50、ERK1和ERK2 mRNA相对表达量均极显著低于其他实验组大鼠关节中的表达量(P<0.01)。(2)空白对照组、低浓度二妙散和高浓度二妙散组NF-κBp50表达均显著低于模型组(P<0.05),中浓度二妙散组极显著低于模型组(P<0.01)。空白对照组、3种浓度二妙散组的ERK1/2蛋白表达均极显著低于模型组(P<0.01)。4.大鼠关节组织中NF-κBp50、ERK1和ERK2定位分析在不同实验组大鼠关节组织的滑膜成纤维细胞、内皮细胞、基质细胞和巨噬细胞中检测到阳性信号,NF-κBp50、ERK1和ERK2在中浓度二妙散组表达均显著低于其他实验组(P<0.05);进一步说明在不同实验组大鼠关节组织中均有NF-κBp50、ERK1和ERK2的表达,中浓度二妙散可显著抑制NF-κBp50、ERK1和ERK2的表达。结论:1.成功构建CIA大鼠模型2.验证NF-κBp50和ERK1/2参与RA的发生和发展;3.二妙散可以通过NF-κBp50和ERK1/2影响RA的疾病进程。4.不同浓度二妙散均可抑制炎性因子、NF-κBp50和ERK1/2的表达,以3.0 g/kg浓度尤为显著。