一氧化氮(NO)是一种重要的生物信号分子,它与生物体内的多种生理和病理机制密切相关。荧光成像法是研究NO的一种有效方法,但是,普通弥散性分布的探针只能检测NO的空间整体平均分布水平。为助于研究一氧化氮在细胞内外的生物学与化学功能,理想的一氧化氮荧光探针可以用于检测局部、亚细胞结构NO分布水平的改变。而HaloTag等蛋白质标记技术为解决这一问题提供了有效方法。本文介绍了一种新型的HaloTag蛋白靶向的荧光探针用于局部NO的检测与成像。本文首先制备了用于HaloTag蛋白标记的连接子2-(2-(6-氯己氧基)乙氧基)乙胺,并改进其提纯方法。然后合成了6-羧基荧光素用于与反应连接子结合制备用作细胞内蛋白质标记的羧基荧光素二乙酸酯(diAcFAM)配体。使用溴乙酰溴合成了N-(2-(2-(6-氯己氧基)乙氧基))乙基-2-溴乙酰胺,它可以用于含氨基的功能报告基团的HaloTag连接子。同时合成了NO荧光探针5,6-二氨基荧光素(DAF-2)及其二乙酸酯(DAF-2DA),N-(2-(2-(6-氯己氧基)乙氧基))乙基-2-溴乙酰胺与DAF-2DA之间的取代反应条件为室温下以DAF为溶剂、碘化钠为催化剂、碳酸钾为碱,产物混合物经LC-MS分析确认目标产物,并使用制备HPLC分离得到HaloTag-DAF-2DA配体。其二乙酸酯基团可以在渗透进入细胞后被酯酶水解,生成的HaloTag-DAF-2可被预先基因编码的HaloTag蛋白固定,并用于亚细胞结构NO水平的检测。由HaloTag-DAF-2生成HaloTag-DAF-2T后荧光强度增大约85倍。化合物经1HNMR、13CNMR、HRMS、紫外可见光谱、荧光光谱等手段表征。