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目的:本研究以H9C2心肌细胞为实验对象,使用棕榈酸(PA)模拟高脂模型,通过京尼平苷(Gen)预处理H9C2细胞,探讨Gen对PA导致的心肌细胞脂毒性损伤的保护作用及其机制。研究方法:1.采用CCK-8检测不同浓度PA对H9C2细胞存活率的影响,选取造模最佳的PA浓度。分组如下:Control组、PA组(50μΜ、100μΜ、150μΜ、200μΜ、300μΜ);2.采用CCK-8检测不同浓度Gen对H9C2心肌细胞的作用,选取最佳的Gen浓度。分组如下:Control组、Gen组(20μΜ、40μΜ、80μΜ、160μΜ、320μΜ);3.根据前面的实验结果分组如下:Control组、PA组(200μΜ)、Gen+PA组(320μΜGen+200μΜPA、Gen组(320μΜGen);采用CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测Gen是否对PA作用下H9C2心肌细胞有保护作用;采用DHE(ROS)染色和MDA试剂盒检测氧化应激作用;用Western Blot检测相关凋亡蛋白(Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2)、炎症小体(NLRP3)、信号通路相关蛋白(AKT、GSK-3β、PICK1、PKR2)的表达。结果:1.PA浓度从50μΜ到300μM,H9C2细胞存活率逐渐下降;Gen浓度在320μΜ时细胞的存活率最高;Gen浓度在320μΜ时可使PA作用下心肌细胞存活率上升,同时LDH的含量降低,表明Gen对H9C2细胞脂毒性损伤有所减轻,具有保护作用。2.在PA导致的心肌细胞损伤中,预先给予Gen,DHE(ROS)荧光强度明显减弱;MDA含量降低,表明细胞内的氧化应激有所减弱。3.PA诱导H9C2心肌细胞凋亡的相关蛋白Cleaved-Caspase-3和Bax增加、Bcl-2的表达下降,药物作用后可逆转上述改变,说明Gen可以抑制心肌细胞损伤引起的凋亡。4.炎症小体在PA作用下升高,在Gen作用下降低,可见Gen对心肌细胞脂毒性损伤的保护与抑制炎症有一定的关系。5.PA能够显著降低P-AKT和P-GSK-3β的表达,Gen作用后,可上调P-AKT和P-GSK-3β的蛋白水平,对抗脂毒性损伤;6.PA可抑制PKR2的表达及增加PICK1的表达,Gen作用可逆转上述改变。结论:1.Gen可增加PA作用下H9C2细胞存活率,抑制LDH活力,提示其对心肌细胞损伤有保护作用。2.Gen可抑制PA作用下H9C2细胞中ROS的产生,降低MDA含量;并且调控凋亡相关蛋白(Cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2)及炎症小体(NLRP3),提示Gen保护作用与抑制氧化应激、凋亡和炎症密切相关。3.Gen可增加PA作用下H9C2细胞中P-AKT和P-GSK-3β和PKR2蛋白水平,抑制PICK1蛋白表达,提示Gen的保护作用可能与AKT/GSK-3β通路、PKR2及PICK1蛋白相关。