论文部分内容阅读
背景心肌缺血再灌注损伤(MI/R)后心肌细胞死亡的形式是梗死和凋亡。Κ-阿片受体在再灌注开始时的激活可以减少MI/R导致的心肌梗死,但Κ-阿片受体在再灌注开始时的激活能否减少心肌细胞凋亡没有报道。PI3K-Akt-eNOS-NO是许多心肌保护药物保护作用的重要作用机制,但PI3K-Akt与Κ-阿片受体介导的保护作用的关系鲜有报道。目的(1)观察U50,488H对缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡的影响;(2)观察U50,488H对缺血再灌注损伤的心肌细胞中PI3K-Akt-eNOS-NO信号通道的影响;(3)明确PI3K-Akt-eNOS-NO信号通道与U50,488H的抗心肌细胞凋亡作用关系。方法将60只健康成年SD大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注(I/R)生理盐水组、U50,488H组、U50,488H+Nor-BNI组、U50,488H+Wortmannin组、U50,488H+L-NAME组,每组5-6只。U50,488H为选择性κ-阿片受体激动剂,Nor-BNI为选择性κ-阿片受体拮抗剂,Wortmannin为选择性PI3K抑制剂,L-NAME为一氧化氮合成酶( NOS)抑制剂。给予30min心肌局部缺血+3h再灌注后处死动物,检测各组大鼠心梗面积、心肌细胞凋亡比例、心肌组织中Caspase-3蛋白活性、Akt、eNOS水平及其磷酸化程度、NO水平等。原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,给予模拟的缺血再灌注(SI/R),模拟缺血后,在模拟再灌注时分别给予正常DMEM培养液对照、U50,488H、U50,488H+Nor-BNI、U50,488H+Wortmannin、U50,488H+L-NA- ME和U50,488H+选择性Akt抑制剂处理。检测各组心肌细胞凋亡比例、心肌细胞中Caspase-3蛋白活性、Akt、eNOS水平及其磷酸化程度、培养液中NO水平等。结果再灌注结束后,与给予生理盐水组相比, U50,488H组的心梗面积、心肌细胞凋亡比例、心肌组织中Caspase-3蛋白活性明显下降,心肌中Akt、eNOS磷酸化水平及NO水平上升;而U50,488H+Nor-BNI组、U50,488H+Wortmannin组各项指标均与给予生理盐水组无显著差异。U50,488H+L-NAME组的Akt、eNOS磷酸化水平上升,与U50,488H组无明显差异,但心肌细胞凋亡比例及NO水平与生理盐水组无明显差异。模拟缺血再灌的心肌细胞中,与给予DMEM的对照组相比,U50,488H组的心肌细胞凋亡比例、心肌细胞中Caspase-3蛋白活性明显下降;心肌细胞中Akt、eNOS磷酸化水平及NO水平上升。U50,488H+Nor-BNI组、U50,488H+Wortmannin组、U50,488H+选择性Akt抑制剂组各项指标均与给予生理盐水组无显著差异。U50,488H+L-NAME组的Akt、eNOS磷酸化水平上升,与U50,488H组无明显差异,但心肌细胞凋亡比例及NO水平与生理盐水组无明显差异。结论(1)U50,488H可减少在体大鼠心脏局部心肌缺血再灌注损伤(MI/R)和原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤(SI/R)诱导的心肌细胞凋亡。(2) U50,488H可增加在体大鼠心脏局部心肌缺血再灌注损伤(MI/R)和原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤(SI/R)中心肌细胞Akt和eNOS的磷酸化,进而增加NO的产生,这一作用可能介导了U50,488H后处理的抗心肌细胞凋亡作用。(3)通过观察U50,488H对缺血再灌注心肌中Akt、eNOS磷酸化及NO含量的影响和PI3K、Akt、NO选择性抑制剂对U50,488H后处理抗凋亡作用的影响,证实U50,488H后处理的抗凋亡作用依赖于其激活PI3K-Akt-eNOS-NO信号通路的作用。