小麦亲和性根际解磷菌的筛选及其促进小麦生长的研究

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为筛选具有小麦亲和性的根际解磷菌(PSB),考察PSB对小麦生长的促进作用,本文采用解磷培养基初筛,提取的麦胚凝集素复筛,获得大量的小麦亲和性根际解磷菌。通过对这些菌株促生长能力研究,选取2株促生长性能优良的菌株进行发光酶lux AB标记,采用根袋试验,追踪2株标记菌株在小麦根际定殖的时间与空间特征,考察其促进小麦根系发育情况。为小麦专用生物菌肥的研发提供理论依据和试验材料。按照研磨过筛、丙酮抽提、石油醚脱脂、PBS缓冲液浸提、硫酸铵沉淀、65°C热水处理、微孔过滤的步骤在4°C层析柜中提取麦胚凝集素。采用解磷细菌培养基和麦胚凝集素双重筛选技术,从健康小麦幼苗根际土壤中筛选出22株具有促生潜力的小麦亲和性解磷菌。对筛选到的解磷菌进行促生特性研究。采用钼兰比色法检测亲和性PSB的解磷能力,试验结果表明,共有7株PSBs的培养液中磷浓度大于100μg/ml,其中,P12的解磷能力最强,达到179.3μg/ml;产铁载体试验表明,22株PSBs均具有产铁载体能力,其中,有11株PSBs产铁载体能力达到5+;产IAA试验表明,共有20株PSBs具有产IAA能力,其中,10株PSBs的产IAA能力大于10μg/ml以上,P3产IAA能力最强,达42.99μg/ml;采用平板对峙试验考察小麦根际促生细菌对5株植物病原菌的抑制作用,发现4株PSBs对植物病原菌有抑制作用,其中,P15、P20具有抑制小麦纹枯病菌和小麦全蚀病菌的作用。形态学试验、生理生化试验与16S r DNA结合鉴定22株小麦亲和性PSB。经鉴定,22株小麦亲和性PSBs分属6个属,分别是芽孢杆菌属、假单胞菌属、节细菌属、黏液杆菌属、马赛菌属、混合地神菌。根据以上试验结果,选取2株具有较好促生效果的菌株P34和WS32,采用电转化将发光酶lux AB基因导入细胞中,获得标记菌株P34-L和WS32-L,经连续传代,证明质粒DNA可稳定遗传。测定出发菌株与标记菌株的溶磷能力、产铁载体能力,发现差异很小,说明外源质粒DNA的导入没有改变原始菌株的促生长特性。采用根袋种植小麦,用2株标记菌株处理小麦种子,检测标记菌株在根部定殖的时间和空间特征,考察根系的发育情况。试验结果显示,2株标记菌株在不同时间和空间上有不同的定殖水平,小麦生长6 d时,P34-L和WS32-L已随着根的生长达到8 cm的深度,在根的各个部位均达到较高的定殖密度;小麦生长12 d,18 d,30 d,由于外界环境的因素,导致2株标记菌株在不同根段的定殖数量均呈现动态的水平;小麦生长36 d,2株标记菌株在8 cm以下的密度呈上升趋势,P34-L和WS32-L的定殖密度分别达到1.1×107 CFU·g-1、1.3×106 CFU·g-1。2株标记菌株均能促进小麦根系发育及干物质积累,能显著促进地上部分干重、根系干重及植株总干重的积累,能显著促进总根长、总根表面积、根尖数、分支数、交叉数等指标的增加。2株PSB均有较强的根际定殖能力,能长期在小麦根际生活定居,能促进小麦干物质积累,促进小麦的根系发育,对小麦的生长发育均起到积极的影响。
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