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目的: 肥胖症已经成为危害人类健康的重要疾病,与心脑血管疾病、2型糖尿病、血脂紊乱、呼吸睡眠暂停综合症等疾病的发生有密切的关系。过多的热量摄入并以甘油三脂的形式存储在白色脂肪细胞内是肥胖发生的关键。前脂肪细胞的增殖和分化是成熟脂肪细胞形成的核心,从前脂肪细胞分化成为成熟的脂肪细胞的过程十分复杂,特别是机体内多种细胞因子和激素在脂肪细胞发生过程中可能都有调节作用。了解这些作用对于探讨肥胖发生的机理以及为开发减重药物寻找新的作用靶点都有十分重要的意义。由于血清中富含各种细胞因子和激素会对研究它们真实的作用产生干扰,而且不同来源的前脂肪细胞也会得到不同的研究结果。胰岛素样生长因子(IGF-1)和生长激素(GH)都是体内与生长有关的重要激素。Ghrelin是近年发现的一种与肥胖发生有关的肽类激素,它通过下丘脑的神经肽Y调节食欲发挥作用。本课题旨在本实验室建立小鼠3T3-L1和原代人前脂肪细胞的培养方法,以及在无血清条件下维持细胞的增殖和分化。并且初步研究在相同的培养条件下hIGF-1、hGH对两种前脂肪细胞增殖和分化的影响,并且首次研究rGhrelin对前脂肪细胞的直接作用,为进一步针对作用机理的研究打下基础。 方法: 1.采用胶原酶消化以及筛网过滤的方法从人皮下脂肪中分离出前脂肪细胞,并进行原代培养,通过观察细胞形态学的变化、油红O对细胞内脂质染色,以及对脂肪细胞标志性酶G-3-PDH活性的测定对细胞进行鉴定。噻唑兰(MTT)方法观察小鼠前脂肪细胞3T3-L1和原代培养人前脂肪细胞增殖情况。通过对前脂肪细胞分化过程中形态学的改变、油红O染色以及G-3-PDH酶活性的测定,观察小鼠前脂肪细胞3T3-L1和原代培养人前脂肪细胞分化的过程。 2.以MTT法观察hIGF-1、hGH、rGhrelin对两种前脂肪细胞增殖的影响,用RT-PCR的方法研究小鼠前脂肪细胞3T3-L1增殖过程中rGhrelin对细胞内