目的：血友病B是一种严重危害人类健康的遗传病,通过对3个血友病B家系的FⅨ基因进行突变分析,建立简易、准确和快速的血友病B基因诊断实验室方法；以揭示这些家系患者发病的分子机制；并判断携带者以预防患儿的出生,减少血友病B的发病率；同时在法医鉴定中明确伤病关系也有一定实践意义。方法：收集3个血友病家系临床资料和血样,提取基因组DNA。采用PCR扩增凝血因子Ⅸ的8个外显子及其侧翼序列并进行DNA序列分析；利用FⅨ基因外6个多态性和杂合率高的短串联重复序列(short tandem repeat, STR)、DXS1192、DXS1211、DXS1227、DXS8013和DXS8094,进行连锁分析。结果：序列分析表明家系1患者存在突变6409 G→A,导致第12位甘氨酸Gly突变为精氨酸Arg；待检女性Ⅲ3第6409位碱基为“G”,为正常女性；家系2患者存在突变6364C→T,导致第-4位精氨酸Arg突变为色氨酸Trp；待检女性Ⅱ9第6364位碱基为“C”,为正常女性；而Ⅲ6携带该位点的杂合突变；家系3患者存在30383 G→C,导致第135位缬氨酸Val突变为亮氨酸Leu,待检女性Ⅱ2第30383位碱基为“G”,为正常女性。DXS8094和DXS1211基因座连锁分析结果显示家系1的Ⅲ3获得正常的X染色体；DXS1211和DXS102基因座连锁分析结果支持家系2的Ⅱ9获正常的X染色体,而Ⅲ6获得与致病的X染色体。结论：替换突变是这三个血友病B家系发病的主要机制；发现了一例携带者；突变分析结合连锁分析是检测携带者的有效方法。