【摘 要】
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目的:研究转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1.TGF-β1)对肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)活化的影响及机制,进一步揭示肝纤维化的发病机理,为肝硬化
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目的:研究转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1.TGF-β1)对肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)活化的影响及机制,进一步揭示肝纤维化的发病机理,为肝硬化防治提供新的靶点。方法:在培养的肝星状细胞系中加入不同浓度的TGF-β1(终浓度分别为0.2、1.0、5.0ng/ml)培养48h。常规细胞免疫组化(SABC法)检测肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, a-SMA)的表达;高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)测定细胞培养液非对称性二甲基精氨酸(asymmetric-dimethylarginine, ADMA)的含量,HPLC测定细胞冻融液代谢ADMA的能力反映二甲基精氨酸-二甲胺水解酶(dimethylarginine dimethylaminohydrolase, DDAH)的活性;逆转录-PCR (RT-PCR)法检测肝星状细胞DDAH1mRNA表达水平,研究TGF-β1对HSC的激活作用是否与DDAH/ADMA通路有关。结果:1、免疫组化结果显示TGF-β1可呈浓度依赖性增加肝星状细胞α-SMA的表达水平,促进HSC的活化。2、RT-PCR检测肝星状细胞DDAH1mRNA的变化,可发现TGF-β1呈浓度依赖性下调DDAH1mRNA表达。3、利用高效液相色谱法发现,随着TGF-p,作用浓度增加,DDAH1活性逐渐降低,ADMA合成逐渐增加。结论:1、TGF-β1对活化型的HSC依然具有较强的活化作用,且这种作用具有一定浓度依赖性。2、DDAH/ADMA通路存在于HSC。3、TGF-β1对HSC的活化作用可能与DDAH/ADMA通路有关。
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