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目的:为了研究1株弗劳地枸橼酸杆菌同时携带多种耐药基因导致的多重耐药现象,以及所携带的耐药基因类型和分子生物学特征,探讨其可能的耐药机制。
方法:收集一株分离自一位23岁急性淋巴细胞白血病男性住院患者痰标本中的弗劳地枸橼酸杆菌NC118。采用Kerby-Bauer纸片扩散法测定其药物敏感性,Etest法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MICs);应用PCR法检测β内酰胺酶基因,质粒传染的喹诺酮耐药决定因素qnr,16SrRNA甲基化酶基因等,并对PCR阳性产物进行DNA序列分析;采用接合试验测定耐药基因是否具有转移性;使用QIAGEN质粒抽取试剂盒来提取弗劳地枸橼酸杆菌NC118的质粒,并对提取的质粒DNA进行电泳。
结果:弗劳地枸橼酸杆菌NC118除了对四环素敏感外,对其他临床常用抗生素全部耐药:该菌株同时存在11种抗生素耐药基因,包括KPC-2,aac(6)-Ib-Ir,qnrA1,qnrB1,blaTEM-1,blaCTX-M-3,blaCTX-M-14,armA,aadA2,dfrA12和blaCMY-49;经过反复接合试验,弗劳地枸橼酸杆菌NC118只能将携带的ESBLs耐药质粒成功地传递给受体菌E.coliJ53,但未获得含其他耐药质粒的接合子。抽取的质粒进行电泳显示,弗劳地枸橼酸杆菌NC118含有4个质粒,大小分别约为50.0kb,7.0kb,4.0kb和2.0kb。
结论:弗劳地枸橼酸杆菌NC118同时携带多种耐药基因,包括一个新型AmpC酶基因,由于同时携带多种耐药基因导致该菌株产生多重耐药现象。接合试验发现ESBLs酶基因位于可转移的质粒上,可通过质粒将耐药基因传递给其他菌株,造成耐药基因水平性的传播。而blaCMY-like基因是一种新型的AmpC酶基因,可能是位于染色体上,对该酶的功能需进行更进一步研究。另外耐药基因可能是通过整合子或可转移元件等其他方式进行播散的,尚需进一步的实验来证实之。