【摘 要】
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在哺乳动物中,甲硫氨酸(Met)是种必需的氨基酸,通过转硫作用,先形成同型半胱氨酸(Hcy),再转化为半胱氨酸(Cys)。Hcy经过两步反应生成半胱氨酸。第一步在胱硫醚β-合酶(cystat
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在哺乳动物中,甲硫氨酸(Met)是种必需的氨基酸,通过转硫作用,先形成同型半胱氨酸(Hcy),再转化为半胱氨酸(Cys)。Hcy经过两步反应生成半胱氨酸。第一步在胱硫醚β-合酶(cystathionine beta-synthase,CBS)的作用下与丝氨酸(Ser)缩合成胱硫醚,第二步,胱硫醚在γ-裂解酶的作用下形成半胱氨酸。CBS在人体内转硫作用中起到至关重要的作用。最近几年的研究发现,高Hcy血症是导致心血管疾病的一个独立危险因素。在正常情况下,CBS可使Hcy与Ser缩合为胱硫醚,代谢掉多余的Hcy。当CBS活性下降时,便引起Hcy堆积,导致高Hcy血症。 构建了重组质粒pGEX-4T-1-CBS,然后转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。通过对诱导表达条件的优化,25℃,IPTG浓度为0.2mM,诱导12h,表达出可溶蛋白。经两次Sephrose-镍亲和层析柱纯化和G-25脱盐,thrombin酶切,由SDS-PAGE鉴定产物的分子量约63kDa。CBS在大肠杆菌中成功得到表达。 CBS在一定条件下可以催化Hcy和Ser缩合成胱硫醚,产生出胱硫醚,通过高效液相色谱法(HPLC)检测到有胱硫醚产生,原核表达出来的CBS具有生物学活性。
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