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目的:研究凉血通瘀方调节肠道微生物治疗脑出血的神经保护机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、凉血通瘀组和益生菌组五组,建立脑出血模型。用药后第1天、第3天和第5天用Longa五级评分法、平衡木法对脑出血大鼠进行行为学评分,观察药物对神经功能缺损的影响;血红蛋白间接转换法测定脑血肿含量。对粪便进行微生物环境基因组学测序,解析凉血通瘀方对肠道微生物的影响。Western blot检测脑组织BDNF蛋白表达,研究凉血通瘀方对神经元保护的影响;ELISA法测定血清TLR4、IL-1β和IL-6的含量,RT-PCR检测脑组织TLR4、IL-1β和IL-6的mRNA表达,研究凉血通瘀方对炎症免疫功能的影响。RT-PCR检测脑组织CuZnSOD的mRNA表达、硫代巴比妥酸反应法测定脑组织和血清MDA含量,研究凉血通瘀方对氧化应激反应的影响。结果:1.对脑损害的影响。(1)行为学评分:凉血通瘀组、益生菌组神经功能缺损明显改善,用药后第3d、第5d Longa及平衡木测试评分明显低于模型组(P<0.05,P<0.01);(2)脑组织血肿含量:第3d、第5d凉血通瘀组、益生菌组脑血肿含量显著低于模型组,明显促进血肿吸收(P<0.05)。2.对肠道微生物的影响。(1)肠道微生物群的Beta多样性分析:肠道微生物群分布模型组第3d与第5d类似;凉血通瘀组第1d与模型组第1d分布类似;凉血通瘀组第3d、第5d分布最为类似,且与假手术组同时间点群分布类似。说明凉血通瘀方可改善肠道菌群构成。(2)肠道微生物物种丰富度和均匀度的Alpha多样性分析:Chao指数、Ace指数、Shannon指数、Simpson指数和分度等级曲线显示,假手术组5d、凉血通瘀组1d、5d大鼠肠道微生物物种丰富度和均匀度最高,模型组1d、3d、假手术组1d最低,说明脑出血可引起肠道微生物丰富度下降、微生物分布紊乱,而经凉血通瘀方治疗后可恢复肠道微生物菌群丰富度,促使肠道微生物分布均匀。3.对炎症反应的影响。(1)WesternBlot检测脑组织BDNF蛋白表达结果显示:凉血通瘀组1,3,5d、益生菌组Id 比模型组表达显著升高(P<0.01),凉血通瘀方和益生菌制剂均发挥神经营养作用。(2)ELISA检测血清中TLR4含量显示,凉血通瘀组3d和益生菌组1d较模型组明显降低(p<0.05);检测血清中IL-1β含量显示,凉血通瘀组1d和益生菌组1d较模型组明显降低(p<0.05);检测血清中IL-6含量显示,凉血通瘀组1、3d和益生菌组1、3d较模型组显著降低(p<0.01)。凉血通瘀方和益生菌制剂均抑制炎性反应。(3)RT-PCR检测脑组织中TLR4表达量显示,凉血通瘀组5d较模型组明显降低(p<0.05);检测脑组织中IL-1β表达量显示,凉血通瘀组1d和益生菌组1d较模型组显著降低(p<0.01);检测脑组织中IL-6表达量显示无明显差异(p>0.05)。凉血通瘀方和益生菌制剂均抑制炎性反应。4.对神经保护和氧化应激损伤的影响。(1)RT-PCR检测脑组织中CuZnSOD表达量显示,凉血通瘀组1、3、5d和益生菌组1d较模型组明显降低(p<0.01)。凉血通瘀方和益生菌制剂均减轻氧化应激反应;(2)脑组织MDA含量:凉血通瘀组1、3、5d和益生菌组1、3d均较模型组明显降低(p<0.05);血清MDA含量:凉血通瘀组3、5d和益生菌组3d均较模型组明显降低(p<0.05),凉血通瘀方和益生菌制剂均减轻氧化应激损伤。结论:凉血通瘀方可改善神经功能缺损,促进血肿吸收,从而减轻脑损害;凉血通瘀方可恢复肠道微生物群丰富度,促使肠道微生物分布均匀,从而恢复肠道菌群的正常构成;凉血通瘀方可提高BDNF表达、抑制TLR4、IL-1β、IL-6炎性因子水平表达,从而营养神经元、发挥抗炎作用,保护神经功能;凉血通瘀方可减轻氧化应激反应,发挥神经保护作用。