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背景和目的子宫内膜异位症(endometriosis, EMS)是指子宫内膜腺体和间质种植在子宫腔以外引起的一种良性疾病。其发病机制至今尚未明了，EMS表现出邻近器官种植和破坏，周围组织的侵润，远处部位转移，无限制的生长，治疗彻底更困难和快速复发等常见的生物学行为，是具有类似恶性肿瘤生物学特质的一种良性病变，因此影响肿瘤细胞脱离、迁移、粘附、降解及浸润增殖过程的相关各种分子被广泛应用于EMS的研究。多配体蛋白聚糖-1(Syndecan-1, SDC-1)属于跨膜黏蛋白聚糖家族成员，是一个经典的生长因子、血管生成因子、趋化因子，其硫酸肝素侧链(heparansulfate, HS)链具有广泛的结构异质性，结合细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)、细胞表面黏附分子、生长因子、酶等，参与细胞增殖、黏附、迁移和血管生成等过程。人类白细胞抗原G(humanleucocyteantigen-G, HLA-G)是非经典性的MHC-Ib类抗原分子，通过抑制NK细胞和T淋巴细胞的活性，参与肿瘤细胞的免疫逃逸。ECM的降解是EMS异位内膜细胞侵袭和种植的主要途径，而MMPs在ECM的降解中起重要作用。基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9, MMP-9)可降解ECM，穿透细胞的基底膜，通过与整合素的相互作用，从而加强细胞-细胞间的黏附作用，同时促进血管内皮细胞的出芽，利于新生血管的形成。目前，国内外尚未见报道关于联合检测SDC-1、HLA-G和MMP-9在EMS患者中表达水平的研究。本实验通过免疫组化S-P法(immunohistochemical S-Pmethod)和酶联免疫吸附法(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对EMS患者异位内膜、在位内膜组织及血清中SDC-1、HLA-G和MMP-9的表达水平进行研究，分析其表达水平与EMS临床分期的关系，并分析三者之间的关系，以探讨SDC-1、HLA-G和MMP-9在EMS发病机制中的作用，为EMS的发病机制和临床研究提供理论依据。材料和方法1研究对象1.1随机抽取2012年7月至2013年9月我院妇科收治的经腹腔镜及病理诊断证实为卵巢子宫内膜异位囊肿的患者88例。采用1985年美国生育学会修订的EMS临床分期标准(R-AFS)进行分期：Ⅰ-Ⅱ期44例，Ⅲ-Ⅳ期44例，对照组为35例同期入院行宫腹腔镜手术的子宫纵膈患者。1.2对88例卵巢子宫内膜异位囊肿标本进行苏木素伊红(HE)染色后筛选纳入实验组60例，Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期各30例，取卵巢子宫内膜异位囊肿部分囊壁作为标本，纳入异位内膜组；60例EMS患者中48例患者，Ⅰ-Ⅱ期25例，Ⅲ-Ⅳ期23例，因有生育要求同时行宫腔镜检查，排除内膜病变，取宫腔在位内膜作为标本，纳入在位内膜组；35例子宫纵膈患者的标本，排除EMS、子宫内膜病变及其它疾病，取子宫正常内膜作为标本，纳入对照组。1.3123例均于术前清晨抽取空腹肘静脉血。1.4以上纳入标准：(1)育龄期女性，月经周期基本正常；(2)3个月内无激素类药物应用史；(3)无其他系统疾病，尤其排除恶性肿瘤；(4)无急、慢性炎症及其他盆腔疾病；(5)所取标本时间均为患者处于月经周期的增殖期。2实验方法2.1利用免疫组化S-P法检测EMS患者异位内膜、在位内膜及对照组中SDC-1、HLA-G和MMP-9的表达水平。2.2利用ELISA法检测EMS患者及对照组血清中SDC-1、HLA-G和MMP-9的表达水平。3统计学方法所有实验数据均采用SPSS17.0统计软件包进行统计分析，定量资料的统计分析以均数±标准差(±s)表示；两组独立样本的比较采用独立样本t检验；两两间比较采用最小显著性差异法(LSD-t)检验；多组间比较采用单因素方差(ANOVA)分析；相关性采用Pearson直线相关性分析；敏感度和特异度采用应用受试者工作特征曲线(ROC)分析。检验水准α=0.05。结果1．EMS组和对照组组织中SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白表达水平SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白主要表达于EMS患者异位内膜和在位内膜组织的腺上皮细胞胞质中，间质细胞的胞质也有少量表达。异位内膜组、在位内膜组和对照组组织中SDC-1蛋白的平均光密度(OD)值分别为：146.35±19.56、114.86±13.67和70.30±11.23，(F=277.44,P=0.000)；HLA-G的平均OD值分别为：152.69±16.08、129.06±8.93和61.95±9.40，(F=654.84,P=0.000)；MMP-9的平均OD值分别为：148.11±22.88、117.57±8.72和83.98±9.74，(F=188.97,P=0.000)。两两比较SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白在异位内膜组、在位内膜组中的平均OD值均高于对照组(P<0.05)，SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白在异位内膜组的平均OD值高于在位内膜组(P <0.05)。EMS异位内膜组中，SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白在Ⅰ-Ⅱ期的平均OD值分别为：129.33±5.08、139.83±7.38和130.85±15.21，在Ⅲ-Ⅳ期的平均OD值分别为：163.37±12.39、165.55±11.39和165.36±14.76；在EMS在位内膜组中， SDC-1、 HLA-G和MMP-9蛋白在Ⅰ-Ⅱ期的平均OD值分别为103.39±8.02、122.64±4.03和110.61±6.67，在Ⅲ-Ⅳ期的平均OD值分别为126.33±6.57、135.49±7.77和124.54±3.10。SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白的平均光度值在EMS异位内膜和在位内膜组织III-IV期均高于I-II期(P均<0.05)。2．EMS组和对照组血清中SDC-1、HLA-G和MMP-9的表达水平SDC-1、 HLA-G和MMP-9在EMS组血清中的表达水平分别为：3888.34±607.38μg/L、3888.34±607.38μg/L和15.42±2.61μg/L，在对照组血清中的表达水平分别为：1481.91±482.49μg/L、5.77±1.82μg/L和9.01±3.15μg/L；SDC-1、HLA-G和MMP-9在EMS患者血清中的表达水平高于对照组(P均<0.05)。EMS组中SDC-1、HLA-G和MMP-9在Ⅰ-Ⅱ期的表达水平分别为：3463.20±352.24μg/L、9.98±2.30μg/L和14.84±2.871μg/L，在Ⅲ-Ⅳ期的表达水平分别为：4313.48±502.44μg/L、11.50±1.54μg/L和16.01±2.20μg/L；SDC-1、HLA-G和MMP-9在EMS组血清中III-IV期的表达水平明显高于I-II期(P均<0.05)。3．经ROC曲线分析表明SDC-1、HLA-G和MMP-9联合检测诊断EMS的敏感性和特异性分别为93.18%和94.28%，三者联合诊断EMS的敏感度和特异度明显高于单独检测或者两两联合检测。4．EMS组和对照组中SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白之间相关性分析EMS异位内膜组中SDC-1、 HLA-G与MMP-9的表达水平均呈正相关(r=0.338,P=0.008；r=0.302,P=0.019)；SDC-1与HLA-G的表达水平无相关性(r=0.185,P=0.157)。EMS在位内膜组中SDC-1、HLA-G与MMP-9的表达水平均呈正相关(r=0.476,P=0.002；r=0.601,P=0.000)；SDC-1与HLA-G的表达水平无相关性(r=0.161,P=0.273)。对照组中SDC-1与MMP-9、HLA-G的表达水平两两之间分别无显著相关性(r=0.052,P=0.752；r=0.067,P=0.651；r=0.107,P=0.512)。EMS组血清中SDC-1、 HLA-G与MMP-9的表达水平均呈正相关(r=0.683,P<0.05； r=0.456,P<0.05)； SDC-1与HLA-G的表达水平无相关性(r=0.212,P＞0.05)。结论1．SDC-1、HLA-G和MMP-9可能参与EMS的发生、发展过程；2．联合检测SDC-1、HLA-G和MMP-9对EMS的无创诊断有一定的参考价值；3．SDC-1、HLA-G与MMP-9在EMS的发生发展过程中可能有协同作用。