心脑血管疾病因其具有很高的发病率和死亡率,成为目前威胁人类健康的重要杀手。动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是众多的心脑血管疾病(冠心病、脑卒中等)发生发展的重要病理基础。动脉粥样硬化的形成是由多种因素(如高血压、高脂血症、高血糖、吸烟等)导致了动脉血管的内皮功能紊乱,平滑肌细胞发生增殖、迁移,动脉血管壁发生炎症反应,继而形成粥样硬化斑块,在动脉硬化的发生发展过程中,炎症反应贯穿始终。目前随着生活水平的普遍提高,多种高危因素如糖尿病、高脂血症的患病率逐年升高,使动脉粥样硬化的发病率、死亡率增加,严重威胁人类健康及生活。目前国内外许多学者针对关于动脉粥样硬化发病机制做了大量的研究工作,提出了许多假说,如脂质学说、血栓学说、炎症反应学说和损伤学说等。明确动脉粥样硬化的发病机制对于寻求预防措施和治疗手段显得至关重要。目前的研究认为,动脉粥样硬化性疾病是动脉管壁长期慢性进展性炎症性病变,其特征由富含脂质的粥样核心内有炎症细胞聚集以及其表面覆盖的纤维帽构成。从病理学上观察斑块稳定与否与纤维帽的厚度、炎症细胞的聚集程度及胶原组织的含量多少密切相关。而目前的研究证实,斑块内炎症反应的程度是导致纤维帽变薄、斑块不稳定的最为重要的因素。由于炎症介质刺激斑块内炎症细胞活化,后者表达和分泌大量基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs),导致斑块内包括胶原在内的细胞外基质降解,纤维帽变薄,使斑块不稳定,易于破裂,从而产生急性心脑血管事件。基质金属蛋白酶是一组由平滑肌细胞和巨噬细胞分泌和表达的锌离子依赖性内肽酶的总称。MMPs的活性很大程度上决定了动脉粥样硬化斑块纤维帽厚度及其胶原含量。在动脉粥样硬化发生、发展中,基质金属蛋白酶通过降解易损斑块的纤维帽,从而在斑块形成和斑块破裂出血的发生中都起非常重要的作用。因此,MMPs与动脉粥样斑块稳定性的研究已成为目前研究的热点之一。动脉粥样硬化斑块内的MMPs主要是由巨噬细胞及平滑肌细胞分泌,已发现动脉粥样硬化斑块内巨噬细胞聚积区有大量的MMPs存在。MMP-2、MMP-9属于基质金属蛋白酶的明胶酶类,是目前研究较多且对斑块稳定性影响较为明确的两种基质金属蛋白酶。目前对于MMPs表达和功能调控的的信号通路还并不十分清楚,除受内源特异性细胞外抑制剂调节外,还受转录水平和酶原激活等形式调节。CD147分子是一种高度糖基化的、广泛表达的跨膜糖蛋白,最初是从肺癌细胞系LX-1中分离出来,属于免疫球蛋白超家族的成员。CD147分子是基质金属蛋白酶的上游调控因子,它能够以旁分泌的方式在多种细胞质诱导产生过过度MMPs,通过降解细胞外基质中胶原蛋白,从而促进细胞转移和免疫性疾病的炎症活动。目前研究发现CD147可以在平滑肌细胞、内皮细胞、单核细胞等多种细胞中诱导金属基质蛋白酶的产生,其包括MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、1型跨膜基质金属蛋白酶蛋白(Membrane Type1Matrix Metalloproteinase, MT-MMP)等,由此我们推测斑块内CD147通过影响MMPs的表达,对斑块稳定性可能起到重要作用。他汀类是目前治疗心脑血管疾病的常用药物,其对心脑血管病的治疗作用除了依靠其降脂作用外,还得益于多种非调脂作用,如抑制平滑肌细胞的增生、增加一氧化氮的生物合成、改善血管内皮功能、逆转血管重构、抑制血栓形成、抗炎作用、抗氧化和稳定动脉粥样硬化斑块等,这些作用在动脉粥样硬化的防治中占有重要地位。他汀类降脂药的多效性作用越来越受到关注,其抗炎作用是目前研究的热点之一。瑞舒伐他汀作为一种新型的降脂药物在临床上广泛应用,其除了具有强大的降脂作用外,还可在抑制炎症反应、改善血管内皮功能、稳定斑块等方面发挥重要作用。近年来,随着他汀药物在临床的广泛应用,降低了心脑血管疾病的发生率和病死率。本研究通过建立兔颈动脉粥样硬化易损斑块模型,探讨血清炎症因子浓度水平变化、斑块内CD147的表达水平与斑块稳定性的关系,探索瑞舒伐他汀稳定斑块的机制。目的1、利用液氮冻伤联合高脂饮食喂养创建与人动脉粥样硬化斑块相似的兔颈动脉粥样硬化斑块模型,为研究动脉粥样硬化斑块的病理基础及干预治疗奠定基础。2、在上述自创的兔动脉粥样硬化模型基础上,探讨瑞舒伐他汀对兔颈动脉粥样硬化斑块内的CD147表达水平、外周血清金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的浓度水平以及斑块稳定性的影响。方法1、动物模型的建立健康纯种雄性新西兰白兔18只,将动物采用抽签法随机分为3组,分别为：A组为空白对照组：普通饲料喂养；B组为模型对照组：造模+高脂饲料喂养；C组为药物干预组：造模+高脂饲料+瑞舒伐他汀钙片(2.5mg/kg/d)。普通饲料适应性喂养7天后,对模型对照组及药物干预组实施右颈动脉内膜液氮冻伤术,术后模型对照组及药物干预组高脂饲料喂养13周,行右侧颈动脉内膜液氮激发术,继续喂养1周后处死。空白对照组一直给予普通饲料喂养。2、瑞舒伐他汀药物干预药物干预组第1次术后第一天,开始瑞舒伐他汀灌胃给药,每只兔按2.5mg/kg计算给药,稀释于10ml生理盐水灌胃,每日一次。其他两组予同等剂量的生理盐水。3、分别于实验前、15周末采血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的水平。4、15周末时处死所有动物,取出实验血管作HE染色、Masson三色染色和弹力纤维染色,光镜下观察实验血管病理形态学特点。应用MMP-2、MMP-9的单克隆抗体对实验动物血管进行免疫组织化学染色,以明确斑块局部金属基质蛋白酶系列蛋白表达情况。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测斑块内CD147mRNA表达水平及蛋白质印迹法(Western blot)检测斑块内CD147蛋白表达水平。5、统计学分析：数据应用SPSS13.0软件进行统计学描述与分析,计量资料用均数±标准差表示,两配对样本均数总体比较时采用配对样本t检验。多个样本均数总体比较采用One-way ANOVA(方差不齐时多个样本均数总体比较采用Brown-Forsythe法检验,对自由度进行校正后在进行比较)；方差齐时多个样本均数间的多重比较采用LSD检验(方差不齐时样本均数间的多重比较采用Dunnett’sT3检验),认为P<0.05为差异有统计学意义。结果1、兔总体生长良好。所有18只实验动物全部完成实验,其中B组2只兔子第2次液氮激发术后(14周末)出现脑梗塞。所得18只动物数据参与分析。A组6只,B组6只,C组6只。2、血清MMP-2浓度变化：实验前,各组兔血清MMP-2水平无显著性差异(P>0.05)。第15周末,空白对照组MMP-2水平与同组实验前相比,无显著性差异(P>0.05)；模型对照组和药物干预组MMP-2与同组实验前相比,有显著性差异(P<0.05),表现为其MMP-2水平较实验前分别明显升高。第15周末模型对照组和药物干预组MMP-2水平有显著性差异,表现为药物干预组MMP-2水平明显低于模型对照组(P<0.05)。3、血清MMP-9浓度变化：实验前,各组兔血清MMP-2水平无显著性差异(P>0.05)。第15周末,空白对照组MMP-2水平与同组实验前相比,无显著性差异(P>0.05)；模型对照组和药物干预组MMP-2与同组实验前相比,有显著性差异(P<0.05),表现为其MMP-2水平较实验前分别明显升高。第15周末模型对照组和药物干预组MMP-2水平有显著性差异,表现为药物干预组MMP-2水平明显低于模型对照组(P<0.05)。4、RT-PCR结果：各组均可检测到CD147mRNA表达,各组CD147mRNA表达量均有显著性差异(P<0.05),表现为模型对照组CD147mRNA表达量最高,空白对照组CD147mRNA表达量最低,而药物干预组CD147mRNA表达量介于上述两组之间。模型对照组与空白对照组相比,CD147mRNA表达量升高19.5倍。药物干预组与模型对照组相比,CD147mRNA表达量降低45.3%。5、Western blot结果：各组均可检测到CD147蛋白表达,各组CD147蛋白含量均有显著性差异(P<0.05),表现为空白对照组颈动脉局部CD147蛋白含量最低,模型对照组CD147蛋白含量最高,而药物干预组CD147蛋白含量介于上述两组之间。模型对照组与空白对照组相比,CD147蛋白表达量升高1.37倍。药物干预组与模型对照组相比,CD147蛋白表达量降低17.5%。结论动脉易损斑块局部CD147的表达以及血清MMP-2、MMP-9的浓度水平明显增加。而瑞舒伐他汀可以明显抑制斑块局部CD147的表达及降低血清MMP-2、MMP-9浓度水平。因此,瑞舒伐他汀可能通过抑制CD147表达及降低血清MMP-2、MMP-9等炎症因子水平,从而发挥其稳定斑块的作用。